| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 前言 | 第11-19页 |
| 1 研究目的和意义 | 第11页 |
| 2 肌肉生成抑制素研究概述 | 第11-15页 |
| ·肌肉生成抑制素的发现 | 第11-12页 |
| ·肌肉生成抑制素基因与蛋白的分子结构 | 第12-13页 |
| ·肌肉生成抑制素的合成与分泌 | 第13-14页 |
| ·肌肉生成抑制素的功能 | 第14-15页 |
| ·肌肉生成抑制素的研究展望 | 第15页 |
| 3 酵母双杂交技术概述 | 第15-19页 |
| ·酵母双杂交技术的原理 | 第16-18页 |
| ·常用酵母双杂交技术分类及应用 | 第18-19页 |
| 试验一、牛酵母双杂交诱饵重组重组载体pGBKT7-MSTN的构建与检测 | 第19-35页 |
| 摘要 | 第19页 |
| 1 前言 | 第19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| ·材料 | 第19-23页 |
| ·菌株和质粒及样品采集 | 第19-20页 |
| ·常用化学试剂及试剂盒 | 第20页 |
| ·常用试剂及培养基的配制 | 第20-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·试验方法 | 第23-29页 |
| ·肉牛肌肉组织总RNA提取 | 第23-24页 |
| ·牛肌肉组织总RNA反转录反应(操作过程中同样要避免RNase污染) | 第24页 |
| ·MSTN成熟片段基因PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·pMD18-T-MSTN质粒的构建 | 第25-27页 |
| ·PCR产物进行目的片断的纯化回收 | 第25页 |
| ·DNA片段连接转化反应 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌DH5 α感受态制备 | 第26页 |
| ·pMD18-T-MSTN质粒克隆扩增 | 第26-27页 |
| ·酵母双杂交诱饵重组载体pGBKT7-MSTN的构建 | 第27-28页 |
| ·酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-MSTN检测 | 第28-29页 |
| ·酵母菌Y2H感受态制备 | 第28页 |
| ·诱饵重组载体pGBKT7-MSTN转化酵母菌 | 第28-29页 |
| ·酵母双杂交诱饵重组载体pGBKT7-MSTN毒性检测 | 第29页 |
| ·诱饵重组载体pGBKT7-MSTN宿主菌Y2H保存 | 第29页 |
| 3 实验结果 | 第29-33页 |
| ·牛肌肉组织总RNA提取检测结果 | 第29-30页 |
| ·牛肌肉生成抑制素成熟片段基因PCR扩增结果 | 第30-31页 |
| ·提取pMD18-T-MSTN质粒与双酶切鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·提取pGBKT7-MSTN诱饵重组质粒鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·诱饵重组载体pGBKT7-MSTN转化酵母菌生长情况 | 第33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 试验二、牛肌肉酵母双杂交cDNA文库构建 | 第35-46页 |
| 摘要 | 第35页 |
| 1 前言 | 第35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-41页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-41页 |
| ·牛肌肉组织总RNA提取(方法同实验一 2.2.1 中RNA提取方法) | 第36页 |
| ·牛肌肉组织mRNA分离纯化 | 第36-38页 |
| ·牛肌肉cDNA文库第一链合成 | 第38页 |
| ·长距离PCR合成牛肌肉cDNA文库第二链产物 | 第38-39页 |
| ·牛肌肉cDNA文库第二链产物小片段分离 | 第39-40页 |
| ·双杂交文库构建 | 第40-41页 |
| ·双杂交文库插入片段的菌落PCR验证 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-44页 |
| ·肌肉组织mRNA分离纯化结果 | 第41页 |
| ·牛肌肉cDNA第二链PCR产物合成结果 | 第41-42页 |
| ·牛肌肉cDNA第二链PCR产物小片段分离纯化结果 | 第42-43页 |
| ·cDNA文库滴度与文库容量测定结果 | 第43页 |
| ·cDNA文库酵母菌菌落PCR测定结果 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 1 本研究获得的实验结果 | 第46页 |
| ·诱饵重组质粒构建及是否可利用分析 | 第46页 |
| ·牛肌肉cDNA文库构建结果 | 第46页 |
| 2 本研究的优缺点 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52页 |
