| 缩略词表 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-19页 |
| 参考文献 | 第17-19页 |
| 第一部分 shRNA慢病毒载体在C6细胞中沉默BDNF基因靶点的筛选 | 第19-38页 |
| 1.实验材料 | 第19-22页 |
| ·主要试剂 | 第19-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| 2.实验方法 | 第22-29页 |
| ·shRNA 靶点设计与双链 DNA 制备 | 第22-23页 |
| ·构建 Lentivirus-shRNA 载体 | 第23-24页 |
| ·慢病毒包装 | 第24-25页 |
| ·慢病毒滴度确定 | 第25页 |
| ·shRNA 慢病毒转染 C6 细胞 | 第25页 |
| ·转染效率的检测 | 第25页 |
| ·qPCR 检测 shRNA 慢病毒转染后各组细胞 BDNF mRNA 表达 | 第25-27页 |
| ·Western blot 检测 shRNA 慢病毒转染后各组细胞 BDNF 蛋白的表达 | 第27-29页 |
| ·统计学方法 | 第29页 |
| 3.实验结果 | 第29-33页 |
| ·质粒电泳图和 BamHI 单酶切电泳图 | 第29-30页 |
| ·慢病毒测序报告 | 第30页 |
| ·Lentivirus-shRNA 转染 C6 细胞的效率检测 | 第30-32页 |
| ·Lentivirus-shRNA 转染 C6 细胞后 BDNF mRNA 的表达变化 | 第32-33页 |
| ·Western blot 检测转染后 C6 细胞中 BDNF 蛋白的表达 | 第33页 |
| 4.讨论 | 第33-35页 |
| 5.结论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 第二部分 LVshBDNF-3靶向沉默原代海马神经元BDNF基因及开心散对其的影响 | 第38-45页 |
| 1.实验材料 | 第38-39页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·主要药品与试剂 | 第38-39页 |
| 2.实验方法 | 第39-40页 |
| ·海马神经元细胞的培养 | 第39-40页 |
| ·MAP-2 免疫荧光染色鉴定海马神经元 | 第40页 |
| ·神经元分组及处理 | 第40页 |
| ·qPCR 检测各组细胞 BDNF mRNA 表达 | 第40页 |
| ·Western Blot 检测各组细胞 BDNF 蛋白表达 | 第40页 |
| ·统计学分析 | 第40页 |
| 3.结果 | 第40-42页 |
| ·海马神经元的鉴定与计数 | 第40-41页 |
| ·开心散对 BDNF 基因沉默海马神经元的影响 | 第41-42页 |
| 4.讨论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-45页 |
| 第三部分 LVshBDNF-3沉默SD大鼠海马DG区BDNF基因及开心散的作用机制研究 | 第45-64页 |
| 第一节 LVshBDNF-3 沉默 SD 大鼠海马 DG 区 BDNF 基因模型的制备 | 第47-55页 |
| 1.实验材料 | 第47-48页 |
| ·实验动物 | 第47-48页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第48页 |
| 2.实验方法 | 第48-52页 |
| ·脑立体定位埋植套管 | 第48-50页 |
| ·糖水偏嗜度实验及动物分组 | 第50页 |
| ·旷场实验 | 第50页 |
| ·海马微量注射 LVshBDNF-343 | 第50页 |
| ·qPCR 和 Western blot 检测各时间点 BDNF 基因沉默大鼠模型海马 BDNF 的变化 | 第50-51页 |
| ·BDNF 基因沉默大鼠模型行为学评价 | 第51页 |
| ·统计学方法 | 第51-52页 |
| 3.实验结果 | 第52-55页 |
| ·qPCR 检测各时间点 BDNF 基因沉默大鼠模型海马 BDNF mRNA的变化趋势 | 第52页 |
| ·Western blot 检测各时间点 BDNF 基因沉默大鼠模型海马蛋白的变化趋势 | 第52-53页 |
| ·糖水偏嗜实验评价 BDNF 基因沉默大鼠模型 | 第53-54页 |
| ·旷场实验评价 BDNF 基因沉默大鼠模型 | 第54-55页 |
| 第二节 开心散对 SD 大鼠海马 DG 区 BDNF 基因沉默模型的影响 | 第55-60页 |
| 1.实验材料和方法 | 第55-56页 |
| ·LVshBDNF-3 沉默 SD 大鼠海马 DG 区 BDNF 基因模型的制备 | 第55页 |
| ·体重称量 | 第55页 |
| ·开心散给药 | 第55页 |
| ·Morris 水迷宫 | 第55页 |
| ·qPCR 和 Western blot 检测开心散对 BDNF 基因沉默模型大鼠海马 BDNF 表达的影响 | 第55-56页 |
| ·统计学方法 | 第56页 |
| 2.实验结果 | 第56-60页 |
| ·BDNF 基因沉默模型大鼠的体重变化趋势 | 第56页 |
| ·开心散给药两周后 BDNF 基因沉默模型大鼠行为学变化 | 第56-58页 |
| ·开心散给药两周后对 BDNF 基因沉默模型大鼠学习记忆的影响 | 第58-59页 |
| ·qPCR 检测开心散对 BDNF 基因沉默模型大鼠海马 BDNFmRNA 的影响 | 第59页 |
| ·Western blot 检测开心散对 BDNF 基因沉默模型大鼠 BDNF 蛋白的影响 | 第59-60页 |
| 第三节 讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 综述 | 第65-78页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
