| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-29页 |
| ·病原学 | 第13-15页 |
| ·PCV2 的发现与命名 | 第13页 |
| ·PCV2 理化性质 | 第13-14页 |
| ·PCV2 的复制及细胞培养特性 | 第14-15页 |
| ·分子生物学 | 第15-16页 |
| ·基因组结构 | 第15页 |
| ·PCV2 主要蛋白及功能 | 第15-16页 |
| ·流行病学 | 第16-18页 |
| ·流行情况 | 第16-18页 |
| ·致病性 | 第18页 |
| ·致病机理 | 第18-20页 |
| ·免疫抑制 | 第18-19页 |
| ·其他病原对疾病发展的促进和诱导 | 第19页 |
| ·PCV2 感染猪体内靶细胞的变化 | 第19-20页 |
| ·PCV2 病原学诊断及防治 | 第20-24页 |
| ·诊断技术 | 第20-24页 |
| ·间接免疫荧光试验（IFA） | 第20页 |
| ·单层细胞免疫组化法（IPMA） | 第20-21页 |
| ·免疫组化法（IHC） | 第21页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第21-22页 |
| ·核酸探针及原位杂交技术 | 第22页 |
| ·常规 PCR 方法 | 第22页 |
| ·多重 PCR（MULTIPLEX PCR） | 第22-23页 |
| ·套式 PCR（NESTED-PCR） | 第23页 |
| ·实时定量 PCR（REAL-TIME QUANTITATIVE PCR,RT-PCR） | 第23页 |
| ·10 PCR-限制性长度多态性（RFLP）分析方法 | 第23-24页 |
| ·PCV2 综合防治措施 | 第24页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第24-26页 |
| ·单克隆抗体技术的基本原理 | 第24-25页 |
| ·单克隆抗体的特点 | 第25页 |
| ·单克隆抗体的应用及未来前景 | 第25-26页 |
| ·ORF2 研究进展 | 第26-28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-47页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·细胞及血清 | 第29页 |
| ·试验动物 | 第29页 |
| ·质粒及菌株 | 第29页 |
| ·试剂及耗材 | 第29-30页 |
| ·仪器 | 第30页 |
| ·主要试剂配制 | 第30-32页 |
| ·方法 | 第32-47页 |
| ·PCV2 ORF2 的克隆构建与原核表达 | 第32-39页 |
| ·所需引物的设计和合成 | 第32-33页 |
| ·ORF2 基因片段的 PCR 扩增 | 第33页 |
| ·ORF2 基因片段 PCR 产物的胶回收 | 第33-34页 |
| ·ORF2 基因片段和载体的双酶切及回收纯化 | 第34-35页 |
| ·氯化钙法制备新鲜的 E.COLI感受态细胞 | 第35页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的提取和鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的测序 | 第37页 |
| ·ORF2 重组蛋白的诱导表达 | 第37页 |
| ·ORF2 重组蛋白 SDS-PAGE 蛋白质电泳分析 | 第37-39页 |
| ·ORF2 重组蛋白的纯化及鉴定 | 第39-41页 |
| ·ORF2 重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·ORF2 重组蛋白活性的鉴定 | 第40-41页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第41-42页 |
| ·常规 ELISA 方法操作流程 | 第41页 |
| ·重组蛋白抗原最佳包被浓度与血清稀释度的确定 | 第41页 |
| ·封闭液的选择 | 第41页 |
| ·血清最佳反应时间的确定 | 第41页 |
| ·显色时间的确定 | 第41-42页 |
| ·间接 ELISA 阴阳性临界值的确定 | 第42页 |
| ·特异性试验 | 第42页 |
| ·临床血清样品检测 | 第42页 |
| ·ORF2 蛋白单克隆抗体的制备 | 第42-45页 |
| ·免疫 BALB/C小鼠 | 第42页 |
| ·小鼠血清抗体效价的间接 ELISA 检测 | 第42-43页 |
| ·骨髓瘤细胞 SP2/0 的培养 | 第43页 |
| ·细胞融合 | 第43-44页 |
| ·阳性细胞亚克隆 | 第44页 |
| ·腹水的制备及纯化 | 第44-45页 |
| ·ORF2 蛋白单克隆抗体的鉴定 | 第45-47页 |
| ·单克隆抗体亚型鉴定 | 第45页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体分析 | 第45页 |
| ·阳性克隆的特异性检测 | 第45页 |
| ·单克隆抗体效价测定 | 第45页 |
| ·ELISA 叠加法分析单克隆抗体结合抗原位点 | 第45-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-57页 |
| ·PCV2 ORF2 基因的克隆 | 第47页 |
| ·原核重组表达质粒的构建及鉴定 | 第47-48页 |
| ·原核重组质粒的诱导表达及纯化 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的表达 | 第48页 |
| ·ORF2 重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·ORF2 重组蛋白的鉴定 | 第49-50页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第50-53页 |
| ·重组蛋白抗原最佳包被浓度和血清稀释度的确定 | 第50页 |
| ·封闭液的选择 | 第50-51页 |
| ·血清最佳反应时间的确定 | 第51页 |
| ·显色时间的确定 | 第51页 |
| ·间接 ELISA 阴阳性临界值的确定 | 第51-52页 |
| ·特异性试验 | 第52页 |
| ·临床血清检测结果 | 第52-53页 |
| ·ORF2 单克隆抗体的制备 | 第53-57页 |
| ·ORF2 重组蛋白抗原的含量 | 第53页 |
| ·免疫小鼠抗体检测 | 第53页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第53页 |
| ·单克隆抗体的鉴定结果 | 第53-55页 |
| ·单克隆抗体的亚型鉴定 | 第53页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体分析 | 第53-54页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第54-55页 |
| ·单克隆抗体识别抗原表位分析 | 第55页 |
| ·腹水的制备及纯化 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| ·PCV2 ORF2 的原核表达与纯化 | 第57页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第57-58页 |
| ·ORF2 蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
