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平邑甜茶抗凋亡基因BAG,DAD和HSP70的克隆及其对镉和渗透胁迫的响应

中文摘要第1-10页
Abstract第10-12页
1 前言第12-20页
   ·细胞程序性死亡与细胞凋亡的特征第12-14页
     ·细胞程序性死亡的特征第12-13页
     ·细胞凋亡的特征第13-14页
     ·细胞程序性死亡与胞凋亡区别第14页
   ·凋亡相关基因的结构与功能第14-18页
     ·BAG 基因的结构与功能第14-16页
     ·DAD 基因的结构与功能第16-17页
     ·HSP70 基因的结构与功能第17-18页
   ·研究的目的和意义第18-20页
2 材料与方法第20-33页
   ·试验材料第20-21页
     ·试材第20页
     ·菌株与质粒第20页
     ·酶及生化试剂第20页
     ·PCR 引物第20-21页
   ·试验处理第21-22页
     ·硫酸镉处理第21页
     ·氯化钠(NaCl)处理第21-22页
     ·聚乙二醇(PEG)处理第22页
   ·试验方法第22-33页
     ·平邑甜茶总 RNA 的提取第22页
     ·RT-PCR 反转录合成 cDNA第22-23页
     ·MhBAG 全长序列的扩增第23-28页
     ·MhDAD 全长序列的扩增第28页
     ·MhHSP70 全长序列的扩增第28页
     ·DNA 片段与克隆载体的连接第28页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第28-29页
     ·碱法小量质粒 DNA 的提取第29页
     ·凝胶电泳中 DNA 片段的回收第29-30页
     ·质粒 DNA 的酶切鉴定第30页
     ·基因测序第30页
     ·pET-30a-MhBAG 表达载体的构建第30页
     ·pBI121-正义(反义)表达载体的构建第30-31页
     ·拟南芥转化及转化植株的 PCR 鉴定第31页
     ·根癌农杆菌 GV3101 感受态细胞的制备与转化第31-32页
     ·半定量 RT-PCR 分析第32页
     ·生物信息学分析第32页
     ·细胞凋亡率 FCM 测定第32-33页
3 结果与分析第33-54页
   ·平邑甜茶 MhBAG 基因克隆与蛋白分析第33-41页
     ·MhBAG 基因的克隆与序列分析第33-34页
     ·MhBAG 编码蛋白的结构分析第34-38页
     ·MhBAG 基因的原核表达分析第38-39页
     ·平邑甜茶 MhBAG 表达载体的构建及转染拟南芥第39-41页
   ·平邑甜茶 MhDAD 基因的克隆及蛋白分析第41-46页
     ·MhDAD 基因的克隆与序列分析第41-42页
     ·MhDAD 编码蛋白的结构分析第42-45页
     ·MhDAD 基因表达载体的构建及拟南芥的遗传转化第45-46页
   ·平邑甜茶 HSP70 基因的克隆与序列分析第46-50页
     ·MhHSP70 基因的克隆与序列分析第46-47页
     ·MhHSP70 编码蛋白的结构分析第47-50页
   ·胁迫下抗凋亡相关基因的表达与细胞死亡特征第50-54页
     ·胁迫下根系和叶片中 BAG 基因的表达第50-51页
     ·胁迫下根系和叶片中 DAD 基因的表达第51-52页
     ·胁迫下根系和叶片中 HSP70 基因的表达第52-53页
     ·胁迫下根系和叶片细胞凋亡率变化第53-54页
4 讨论第54-57页
   ·平邑甜茶 MhBAG, MhDAD, MhHSP70 基因的表达特性第54-55页
   ·MhBAG 原核表达体系的优化第55-56页
   ·MhBAG 和 MhDAD 基因正反义表达载体的构建及转化拟南芥第56-57页
5 结论第57-58页
参考文献第58-68页
致谢第68-69页
攻读硕士学位期间完成论文情况第69页

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