| 中文摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 1 前言 | 第17-32页 |
| ·活性氧的产生与清除 | 第17-20页 |
| ·活性氧的产生 | 第17-18页 |
| ·活性氧的清除 | 第18-20页 |
| ·低温胁迫对植物的影响 | 第20-21页 |
| ·植物对低温的响应 | 第21-22页 |
| ·抗坏血酸过氧化物酶的功能和研究进展 | 第22-30页 |
| ·抗坏血酸过氧化物酶的分布 | 第22-23页 |
| ·APX 的分子和酶学特征 | 第23-24页 |
| ·APX 表达的分子机制 | 第24-28页 |
| ·cAPX 表达的信号和调控 | 第24-25页 |
| ·chlAPX 同工酶选择性剪接的调控机制 | 第25-26页 |
| ·藻类中 APX 的表达调控 | 第26-27页 |
| ·APX 表达与体胚 | 第27-28页 |
| ·APX 的组织与发育特异性表达调控 | 第28页 |
| ·APX 的研究进展 | 第28-30页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-57页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·材料处理 | 第32页 |
| ·菌株与质粒 | 第32页 |
| ·酶及生化试剂 | 第32-33页 |
| ·PCR 引物 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-57页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第34-35页 |
| ·反转录 cDNA 第一条链的合成 | 第35页 |
| ·PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·Real-Time PCR 体系及反应条件 | 第36页 |
| ·Southern 杂交分析 | 第36-38页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·基因组 DNA 的限制性内切酶消化 | 第37页 |
| ·转膜及烘膜 | 第37页 |
| ·探针合成 | 第37页 |
| ·预杂交、杂交及放射自显影 | 第37-38页 |
| ·Northern 杂交分析 | 第38-40页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第40-45页 |
| ·转基因番茄植株的 PCR 检测 | 第45-46页 |
| ·CTAB 微量法提取基因组 DNA | 第45页 |
| ·转基因植株的 PCR 筛选 | 第45-46页 |
| ·番茄类囊体膜抗坏血酸过氧化物酶的原核表达及 Western 杂交 | 第46-50页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第46页 |
| ·E.coli BL21 原核表达的诱导 | 第46-47页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第47-48页 |
| ·抗体的制备 | 第48页 |
| ·抗血清效价的测定（试管微量沉淀法） | 第48页 |
| ·Western 杂交 | 第48-50页 |
| ·类囊体膜抗坏血酸过氧化物酶的叶绿体定位 | 第50-52页 |
| ·转基因番茄生理指标的测定 | 第52-57页 |
| ·野生型和转基因番茄叶片 AsA、Glu 含量测定方法 | 第52-53页 |
| ·光合气体交换参数的测定 | 第53页 |
| ·叶绿素荧光参数测定 | 第53页 |
| ·P700 的 820nm 光吸收 | 第53-54页 |
| ·H_2O_2和 O_2的测定 | 第54页 |
| ·膜脂过氧化程度分析 | 第54页 |
| ·APX 酶活性测定 | 第54页 |
| ·SOD 和 CAT 酶活性的测定 | 第54页 |
| ·H_2O_2与 O_2染色分析 | 第54-55页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第55页 |
| ·低温处理植株生长量测定 | 第55页 |
| ·类囊体膜的制备 | 第55页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第55页 |
| ·透射电镜样品的制作与观察 | 第55-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-83页 |
| ·番茄类囊体膜抗坏血酸过氧化物酶 LetAPX 基因的分离 | 第57页 |
| ·LetAPX 基因的序列分析 | 第57-60页 |
| ·LetAPX 全长 cDNA 分析 | 第57-58页 |
| ·LetAPX 编码蛋白质序列分析 | 第58-60页 |
| ·LetAPX 的亚细胞定位 | 第60-61页 |
| ·LetAPX 基因在番茄中的表达分析 | 第61-66页 |
| ·LetAPX 在信号物质和逆境胁迫下的表达分析 | 第61-62页 |
| ·番茄 LetAPX 基因的 Southern 分析 | 第62-63页 |
| ·LetAPX 基因在大肠杆菌中的表达 | 第63-66页 |
| ·原核表达载体 pET-LetAPX 的构建 | 第63-64页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第64-65页 |
| ·不同处理条件下 LetAPX 基因的在蛋白水平的表达分析 | 第65-66页 |
| ·LetAPX 基因在番茄中的遗传转化 | 第66-70页 |
| ·正、反义表达载体的构建 | 第66-68页 |
| ·转 LetAPX 基因植株的鉴定 | 第68-70页 |
| ·LetAPX 的过表达对低温下 APX 活性和 H2O2的影响 | 第70-71页 |
| ·LetAPX 的过表达提高了番茄的耐低温能力 | 第71-75页 |
| ·LetAPX 过表达增加低温胁迫下植株的生长量 | 第71-72页 |
| ·LetAPX 过表达对低温胁迫下光合速率的影响 | 第72页 |
| ·LetAPX 过表达减轻低温胁迫下 PSII 的光抑制 | 第72页 |
| ·LetAPX 过表达对低温胁迫下 REC 和 MDA 的影响 | 第72-73页 |
| ·LetAPX 过表达对低温胁迫下 PSI 光抑制的影响 | 第73-74页 |
| ·LetAPX 过表达对低温胁迫下 AsA-Glu 循环组分的影响 | 第74-75页 |
| ·LetAPX 过表达对低温胁迫下 AsA 组分的影响 | 第74页 |
| ·LetAPX 过表达对低温胁迫下 Glu 组分的影响 | 第74-75页 |
| ·抑制 LetAPX 的表达对低温胁迫下抗氧化酶活性的影响 | 第75-76页 |
| ·抑制 LetAPX 的表达增加了番茄对低温胁迫的敏感性 | 第76-82页 |
| ·抑制 LetAPX 的表达对低温胁迫下光合速率的影响 | 第76-77页 |
| ·抑制 LetAPX 的表达加剧低温胁迫下 PSII 的光抑制 | 第77页 |
| ·抑制 LetAPX 的表达对低温胁迫下 REC 和 MDA 的影响 | 第77-78页 |
| ·抑制 LetAPX 的表达对低温胁迫下 D1 蛋白的影响 | 第78-79页 |
| ·抑制 LetAPX 的表达对低温胁迫下 O2和 H2O2含量的影响 | 第79-80页 |
| ·抑制 LetAPX 的表达对低温胁迫下 AsA 组分的影响 | 第80-81页 |
| ·抑制 LetAPX 的表达对低温胁迫下抗氧化基因的影响 | 第81-82页 |
| ·LetAPX 对低温胁迫下叶片超微结构的影响 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-88页 |
| ·LetAPX基因编码一种类囊体膜型抗坏血酸过氧化物酶 | 第83页 |
| ·LetAPX在RNA和蛋白水平上的表达调控 | 第83-84页 |
| ·过表达LetAPX提高番茄耐低温能力 | 第84-86页 |
| ·反义介导的LetAPX的下调加剧了番茄对低温胁迫的敏感性 | 第86页 |
| ·反义介导的 LetAPX 的下调对番茄抗氧化系统的影响 | 第86-88页 |
| 5 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第100页 |
