多拉菌素产生菌的诱变育种及培养条件的优化
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-23页 |
| ·生物农药 | 第10页 |
| ·农用杀虫抗生素 | 第10-17页 |
| ·阿维菌素(Avermectin) | 第12页 |
| ·伊维菌素(Ivermectin) | 第12-13页 |
| ·多拉菌素(Doramectin) | 第13-17页 |
| ·多拉菌素的理化性质 | 第14页 |
| ·多拉菌素的生物合成途径 | 第14页 |
| ·多拉菌素的抗寄生虫机制 | 第14-15页 |
| ·多拉菌素的抗药性 | 第15页 |
| ·多拉菌素在动物体内的残留研究 | 第15页 |
| ·多拉菌素动力学研究 | 第15页 |
| ·多拉菌素在兽医临床中的应用 | 第15页 |
| ·多拉菌素产生菌的发酵工艺 | 第15-17页 |
| ·农用抗生素的发展及研究现状 | 第17-18页 |
| ·农用抗生素的研究趋向 | 第18-19页 |
| ·筛选新的农用抗生素品种 | 第18页 |
| ·选育高产菌株 | 第18-19页 |
| ·优化发酵过程 | 第19页 |
| ·改造农用抗生素的结构 | 第19页 |
| ·农用抗生素产生菌的诱变育种 | 第19-20页 |
| ·抗生素产生菌诱变育种技术研究进展 | 第20-21页 |
| ·传统诱变育种技术 | 第20页 |
| ·诱变新方法 | 第20-21页 |
| ·原生质体融合技术 | 第21页 |
| ·抗生素产生菌诱变育种的筛选方法 | 第21-22页 |
| ·随机筛选法 | 第21-22页 |
| ·平板菌落预筛 | 第22页 |
| ·本试验研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-32页 |
| ·试验材料 | 第23-25页 |
| ·供试菌株 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·斜面培养基 | 第23页 |
| ·种子培养基 | 第23页 |
| ·液体发酵培养基 | 第23页 |
| ·菌丝体培养基(YEME) | 第23页 |
| ·原生质体再生培养基 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·标准品 | 第23页 |
| ·P缓冲液 | 第23-24页 |
| ·溶菌酶溶液 | 第24页 |
| ·Tris-HCL缓冲液 | 第24页 |
| ·磷酸缓冲液 | 第24页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第24-25页 |
| ·试验中所用到的主要药品和试剂 | 第24-25页 |
| ·试验中所用到的主要试验仪器 | 第25页 |
| ·试验方法 | 第25-27页 |
| ·培养条件 | 第25-26页 |
| ·斜面菌种培养条件 | 第25-26页 |
| ·种子培养条件 | 第26页 |
| ·发酵培养条件 | 第26页 |
| ·原生质体制备培养条件 | 第26页 |
| ·原生质体再生培养条件 | 第26页 |
| ·分析方法 | 第26页 |
| ·HPLC法 | 第26页 |
| ·正突变率的计算 | 第26页 |
| ·诱变处理方法 | 第26-27页 |
| ·斜面菌种制备 | 第26-27页 |
| ·孢子悬液的制备 | 第27页 |
| ·发酵后处理 | 第27页 |
| ·高产菌株的选育 | 第27-29页 |
| ·出发菌株的确定 | 第27页 |
| ·出发菌株的复壮 | 第27页 |
| ·紫外诱变处理 | 第27页 |
| ·DES诱变处理 | 第27-28页 |
| ·紫外线-DES复合诱变 | 第28页 |
| ·NTG诱变育种 | 第28页 |
| ·抗性菌株选育 | 第28页 |
| ·稳定性试验 | 第28-29页 |
| ·原生质体的制备、计数、再生和融合 | 第29-30页 |
| ·原生质体的制备方法 | 第29页 |
| ·原生质体的计数方法 | 第29页 |
| ·原生质体融合的方法 | 第29-30页 |
| ·融合率的计算方法 | 第30页 |
| ·基因组重排 | 第30-31页 |
| ·第一轮原生质体融合 | 第30页 |
| ·杂合再生子代菌丝体的培养 | 第30页 |
| ·第二轮--第五轮原生质体融合 | 第30-31页 |
| ·多拉菌素产生菌发酵工艺研究 | 第31-32页 |
| ·多拉菌素发酵流程 | 第31页 |
| ·发酵培养基优化 | 第31页 |
| ·发酵条件试验 | 第31-32页 |
| 3. 结果与分析 | 第32-48页 |
| ·HPLC定量分析方法的建立 | 第32-33页 |
| ·出发菌株的选择 | 第33页 |
| ·出发菌株的复壮 | 第33页 |
| ·高产菌株的选育结果 | 第33-37页 |
| ·紫外诱变处理 | 第33-34页 |
| ·紫外线照射不同时间的诱变效果比较 | 第33-34页 |
| ·紫外诱变菌株的筛选 | 第34页 |
| ·DES诱变菌株的筛选 | 第34-36页 |
| ·DES不同时间的诱变效果比较 | 第34-35页 |
| ·DES诱变菌株的筛选 | 第35-36页 |
| ·紫外-DES复合诱变 | 第36页 |
| ·紫外—DES复合诱变菌株273 | 第36页 |
| ·紫外—DES诱变菌株的筛选 | 第36页 |
| ·亚硝基胍(NTG)诱变选育 | 第36-37页 |
| ·抗性菌株筛选 | 第37-40页 |
| ·链霉素(Streptomycin)抗性菌株选育 | 第37-38页 |
| ·庆大霉素(Gentamicin)抗性菌株选育 | 第38-39页 |
| ·抗性菌株的遗传稳定性 | 第39-40页 |
| ·基因组重排 | 第40-43页 |
| ·出发菌株的选择 | 第40页 |
| ·原生质体制备条件 | 第40页 |
| ·四亲本重组高产菌株的选育 | 第40-42页 |
| ·传代稳定性试验 | 第42-43页 |
| ·诱变和筛选流程图 | 第43-44页 |
| ·发酵工艺优化 | 第44-48页 |
| ·单因素实验结果 | 第44页 |
| ·发酵温度的确定 | 第44-45页 |
| ·装量实验结果 | 第45页 |
| ·种龄和接种量的影响 | 第45-46页 |
| ·添加前体的量对多拉菌素产量的影响 | 第46页 |
| ·培养时间对多拉菌素产量的影响 | 第46-47页 |
| ·培养条件的优化小结 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
