| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-15页 |
| 目录 | 第15-19页 |
| 缩略词表 | 第19-21页 |
| 前言 | 第21-24页 |
| 第一章 RNA干扰对人骨髓间充质干细胞SMN1基因表达抑制的实验研究 | 第24-49页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器与设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-36页 |
| ·骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定 | 第26-27页 |
| ·SMN1-pRNAT-U6.1/Neo RNA干扰载体的构建 | 第27-30页 |
| ·转染 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR检测细胞内SMN1 mRNA的表达 | 第31-33页 |
| ·Western-Blot检测细胞内全长SMN蛋白的表达 | 第33-35页 |
| ·流式细胞分析 | 第35-36页 |
| ·统计学分析 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-45页 |
| ·MSCs形态及鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pshRNA-SMN1的筛选与鉴定 | 第37-39页 |
| ·质粒转染MSCs后GFP的表达 | 第39页 |
| ·转染pshRNA-SMN1重组质粒后MSCs中内源性SMN1 mRNA的表达 | 第39-42页 |
| ·转染pshRNA-SMN1重组载体后对MSCs内源性全长SMN蛋白表达的影响 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| ·结论 | 第48-49页 |
| 第二章 SMA细胞模型的建立 | 第49-61页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·主要试剂 | 第49-50页 |
| ·主要仪器与设备 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·细胞培养 | 第50页 |
| ·G418筛选获得单克隆株 | 第50页 |
| ·实验分组 | 第50-51页 |
| ·MSCs定向神经元样细胞的诱导分化及鉴定 | 第51页 |
| ·RT-PCR检测诱导前后细胞SMN mRNA的表达 | 第51-52页 |
| ·Western-Blot检测诱导前后细胞内全长SMN蛋白的表达 | 第52页 |
| ·统计学分析 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-59页 |
| ·G418筛选后GFP表达的观察 | 第52-53页 |
| ·MSCs预诱导和诱导后形态观察 | 第53-54页 |
| ·诱导分化后神经元样细胞表面特征抗原鉴定 | 第54页 |
| ·诱导分化后各组神经元样细胞SMN mRNA表达的比较 | 第54-56页 |
| ·诱导分化后各组神经元样细胞fl-SMN蛋白表达的比较 | 第56-57页 |
| ·诱导分化前后各组细胞fl-SMN mRNA、Δ7-SMN mRNA表达的比较 | 第57-58页 |
| ·诱导分化前后各组细胞fl-SMN蛋白表达的比较 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 第三章 SMA模型细胞自发性凋亡与SMN蛋白的保护作用及其机制研究 | 第61-88页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·主要仪器与设备 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-70页 |
| ·实验分组 | 第62-63页 |
| ·绘制细胞生存曲线 | 第63页 |
| ·MTT法测定细胞活力 | 第63-64页 |
| ·Tunel荧光染色测定凋亡细胞数 | 第64-65页 |
| ·流式细胞分析Annexin V法检测细胞凋亡 | 第65-66页 |
| ·RT-PCR检测Caspase-3 mRNA的表达 | 第66-67页 |
| ·RT-PCR检测不同剂量丙戊酸干预后SMN mRNA及Caspase-3 mRNA的表达 | 第67页 |
| ·Western-Blot检测不同剂量VPA干预后全长SMN蛋白及Caspase-3蛋白的表达 | 第67-69页 |
| ·共聚焦显微镜共定位fl-SMN蛋白和Caspase-3蛋白 | 第69页 |
| ·统计学分析 | 第69-70页 |
| ·结果 | 第70-84页 |
| ·细胞生长曲线及细胞增殖变化 | 第70-72页 |
| ·细胞活力变化 | 第72-74页 |
| ·Tunel荧光染色法检测细胞凋亡 | 第74-75页 |
| ·流式细胞分析Annexin V法检测细胞凋亡 | 第75-77页 |
| ·Caspase-3 mRNA的表达 | 第77-79页 |
| ·不同剂量丙戊酸干预后SMA模型细胞SMN mRNA及Caspase-3 mRNA的表达 | 第79-81页 |
| ·不同剂量丙戊酸干预后SMA模型细胞f1-SMN蛋白及Caspase-3蛋白的表达 | 第81-83页 |
| ·fl-SMN蛋白、Caspase-3蛋白的共定位 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| ·神经元样细胞的自发性凋亡 | 第84-85页 |
| ·SMA模型细胞的自发性凋亡 | 第85页 |
| ·丙戊酸可以减少SMA模型细胞的凋亡 | 第85-86页 |
| ·丙戊酸影响SMA模型细胞凋亡的量效关系 | 第86页 |
| ·fl-SMN蛋白与Caspase-3蛋白的相互作用 | 第86-87页 |
| ·结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-95页 |
| 综述 | 第95-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第131-135页 |
| 附录 | 第135页 |
