| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-32页 |
| ·γ-多聚谷氨酸(poly-γ-glutamica cid,γ-PGA)的分子结构 | 第13-14页 |
| ·γ-PGA的合成方法 | 第14-16页 |
| ·提取法制备γ-PGA | 第14页 |
| ·化学合成法 | 第14-15页 |
| ·酶转化法 | 第15-16页 |
| ·微生物发酵法 | 第16页 |
| ·微生物法生产γ-PGA的主要菌株 | 第16-18页 |
| ·γ-PGA工业化生产 | 第18-19页 |
| ·γ-PGA发酵生产的主要影响因素 | 第19-22页 |
| ·碳源对γ-PGA发酵生产的影响 | 第19-20页 |
| ·氮源对γ-PGA发酵生产的影响 | 第20页 |
| ·谷氨酸对γ-PGA发酵生产的影响 | 第20-21页 |
| ·金属离子对γ-PGA发酵生产的影响 | 第21页 |
| ·供氧和pH对γ-PGA发酵生产的影响 | 第21-22页 |
| ·γ-PGA的分离纯化 | 第22页 |
| ·γ-PGA的生物合成机理 | 第22-24页 |
| ·γ-PGA合成酶系及其相关基因 | 第24-26页 |
| ·γ-PGA合成酶系 | 第24页 |
| ·γ-PGA合成酶系的相关基因 | 第24-26页 |
| ·γ-PGA的性质及应用 | 第26-30页 |
| ·γ-PGA的性质 | 第26页 |
| ·γ-PGA的应用 | 第26-30页 |
| ·γ-PGA在医药领域的应用 | 第27-29页 |
| ·γ-PGA在农业领域的应用 | 第29页 |
| ·γ-PGA的其他用途 | 第29-30页 |
| ·本课题主要研究内容 | 第30-32页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第32-41页 |
| ·菌种与质粒 | 第32页 |
| ·仪器与试剂 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·主要试剂及标准品 | 第33页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第33页 |
| ·培养基和培养条件 | 第33-35页 |
| ·主要培养基 | 第33-34页 |
| ·培养方法 | 第34-35页 |
| ·分析测定方法 | 第35-41页 |
| ·pH测定 | 第35-36页 |
| ·含菌量测定 | 第36页 |
| ·γ-PGA的分离纯化 | 第36页 |
| ·γ-PGA的盐酸水解 | 第36页 |
| ·γ-PGA测定方法 | 第36-38页 |
| ·酸水解法测定法 | 第36-37页 |
| ·直接测定法 | 第37页 |
| ·HPCE测定法 | 第37-38页 |
| ·谷氨酸含量测定方法 | 第38页 |
| ·发酵液中糖含量的测定方法 | 第38-39页 |
| ·还原糖浓度测定 | 第38-39页 |
| ·蔗糖浓度测定 | 第39页 |
| ·大肠杆菌细胞超声破碎及胞内蛋白提取 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第40页 |
| ·发酵液粘度测定 | 第40-41页 |
| 第三章 γ-PGA合成酶系相关基因的克隆及表达载体的的构建 | 第41-69页 |
| ·前言 | 第41-42页 |
| ·材料与方法 | 第42-47页 |
| ·菌株、质粒载体及PCR引物 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·DNA操作工具酶和试剂盒 | 第43页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7基因组的提取 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取(碱法) | 第44-45页 |
| ·CaCl_2法制作热休克转化感受态细胞(大肠杆菌) | 第45页 |
| ·PCR反应扩增目的基因pgsB、pgsC、pgsA | 第45-46页 |
| ·PCR反应产物片断与pMD-T simple vector的连接 | 第46页 |
| ·大肠杆菌的热休克转化及阳性克隆的筛选 | 第46-47页 |
| ·DNA的检测 | 第47页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳后回收所需的DNA片断 | 第47页 |
| ·实验结果与讨论 | 第47-69页 |
| ·重组质粒pTrc99A-pgsBCA的构建 | 第47-61页 |
| ·PCR反应扩增目的基因pgsB、pgsC、pgsA及测序结果 | 第47-50页 |
| ·测定PCR反应扩增得到的目的基因pgsB、pgsC、pgsA的序列 | 第50-54页 |
| ·酶切得到保存在T载体上的pgsB、pgsC、pgsA基因 | 第54-56页 |
| ·双酶切质粒pTrc99A得到可同时连接pgsB、pgsC、pgsA基因的载体 | 第56-58页 |
| ·克隆pgsB、pgsC、pgsA基因到质粒pTrc99A上,及阳性克隆的筛选 | 第58-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| ·重组质粒pXMJ19-pgsBCA的构建 | 第61-69页 |
| ·PCR反应扩增目的基因pgsBCA | 第61-63页 |
| ·酶切得到保存在T载体上的pgsBCA基因及双酶切质粒pXMJ19得到可连接pgsBCA基因的载体 | 第63-65页 |
| ·克隆pgsBCA基因到质粒pXMJ19上,及阳性克隆的筛选 | 第65-67页 |
| ·小结 | 第67-69页 |
| 第四章 在大肠杆菌中表达γ-PGA | 第69-77页 |
| ·前言 | 第69页 |
| ·实验材料和方法 | 第69-71页 |
| ·菌株 | 第69页 |
| ·质粒 | 第69页 |
| ·培养基 | 第69-70页 |
| ·分子克隆相关实验 | 第70页 |
| ·质粒提取 | 第70页 |
| ·感受态细胞的制备及质粒转化 | 第70页 |
| ·DNA检测 | 第70页 |
| ·重组大肠杆菌的培养方法 | 第70-71页 |
| ·发酵液中γ-PGA的提取及鉴定 | 第71页 |
| ·实验结果与讨论 | 第71-76页 |
| ·重组E.coli JM109/pTrc99A-pgsBCA的构建 | 第71-72页 |
| ·pgsBCA在E.coli JM109中的表达及表达产物的鉴定 | 第72-73页 |
| ·重组E.coli BL21/pXMJ19-pgsBCA的构建 | 第73页 |
| ·pgsBCA在E.coli BL21中的表达及表达产物的鉴定 | 第73-75页 |
| ·重组E.coli BL21/pXMJ19-pgsBCA合成γ-PGA的培养基优化 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 第五章 在谷氨酸棒状杆菌中表达γ-PGA | 第77-87页 |
| ·前言 | 第77页 |
| ·实验材料和方法 | 第77-79页 |
| ·菌种与质粒 | 第77-78页 |
| ·培养基 | 第78页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌电激转化感受态细胞的制备 | 第78页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌的电激转化及阳性克隆的筛选 | 第78-79页 |
| ·重组菌株的培养方法 | 第79页 |
| ·发酵液中γ-PGA的提取及鉴定 | 第79页 |
| ·实验结果及讨论 | 第79-85页 |
| ·重组谷氨酸棒状杆菌RES167/pTrc99A-pgsBCA的构建 | 第79-81页 |
| ·重组谷氨酸棒状杆菌RES167/pTrc99A-pgsBCA的摇瓶发酵研究 | 第81页 |
| ·重组谷氨酸棒状杆菌RES167/pXMJ19-pgsBCA的构建 | 第81-83页 |
| ·重组谷氨酸棒状杆菌RES167/pXMJ19-pgsBCA的摇瓶发酵研究 | 第83-85页 |
| ·重组质粒对于Corynebbacterium glutamicum RES167生长的影响 | 第83-84页 |
| ·Corynebbacterium glutamicum RES167/pXMJ19-pgsBCA合成γ-PGA能力的鉴定及pgsBCA基因的转录和表达对于Corynebbacterium glutamicum RES167合成谷氨酸的影响 | 第84-85页 |
| ·小结 | 第85-87页 |
| 第六章 Bacillus subtilis ZJU-7发酵工艺研究 | 第87-96页 |
| ·前言 | 第87-88页 |
| ·材料与方法 | 第88-89页 |
| ·菌株 | 第88页 |
| ·培养基 | 第88页 |
| ·培养方法 | 第88页 |
| ·测定方法 | 第88-89页 |
| ·实验结果与讨论 | 第89-95页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7菌株的复壮 | 第89-90页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7在种子培养基中生长曲线的测定 | 第90-91页 |
| ·接种量对γ-PGA产量的影响 | 第91页 |
| ·搅拌转速对发酵过程的影响 | 第91-93页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7发酵培养基氮源替代初步尝试 | 第93-95页 |
| ·小结 | 第95-96页 |
| 结论与展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
