| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-35页 |
| ·IGFS 研究进展 | 第14-19页 |
| ·胰岛素样生长因子-I | 第14-17页 |
| ·胰岛素样生长因子-II | 第17-19页 |
| ·胰岛素样生长因子受体 | 第19-20页 |
| ·胰岛素样生长因子结合蛋白 | 第20-25页 |
| ·IGFBP 超家族组成及性质 | 第20-21页 |
| ·IGFBP 的结构 | 第21-22页 |
| ·IGFBP 的分布与调节 | 第22-23页 |
| ·IGFBP 的功能 | 第23-25页 |
| ·IGFBP4 研究进展 | 第25-33页 |
| ·IGFBP-4 作用的主要方式及作用机理 | 第25-28页 |
| ·IGFBP-4 的生理作用 | 第28-30页 |
| ·IGFBP-4 基因的基因组结构 | 第30-31页 |
| ·IGFBP-4 基因的表达及调控 | 第31页 |
| ·IGFBP-4 蛋白结构与功能的关系 | 第31-33页 |
| ·IGFBP-4 水解酶 | 第33页 |
| ·本实验研究的目的与意义 | 第33-35页 |
| 第二章 IGFBP-4 原核表达载体的构建及鉴定 | 第35-50页 |
| ·实验材料 | 第35-38页 |
| ·实验材料及试剂 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35-36页 |
| ·主要溶液配制 | 第36-38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·化学合成目的基因片段 | 第38页 |
| ·目的基因的扩增 | 第38-40页 |
| ·质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·pGEX-6p-1 表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·连接产物的转化及重组子的筛选、鉴定 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-45页 |
| ·目的基因 PCR 扩增结果 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-50页 |
| ·PCR 扩增目的基因的特异性 | 第45-47页 |
| ·目的基因 IGFBP4 的制备 | 第47页 |
| ·表达载体pGEX-6p-1 的选择 | 第47-48页 |
| ·pGEX-6p-1-BP4 表达重组体的构建和鉴定 | 第48-50页 |
| 第三章 重组 IGFBP-4 基因在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第50-69页 |
| ·材料与方法 | 第50-56页 |
| ·实验材料 | 第50-53页 |
| ·实验方法 | 第53-56页 |
| ·实验结果 | 第56-63页 |
| ·重组工程菌 BL21 | 第56-58页 |
| ·重组工程菌 BL21/BP4 的最佳表达条件的摸索 | 第58-59页 |
| ·GST-IGFBP4 融合蛋白 Glutathion Sepharose~(TM)48 亲和层析结果 | 第59-60页 |
| ·凝胶层析（分子筛层析）和阴离子交换进一步纯化目的蛋白 | 第60-62页 |
| ·目的蛋白含量测定的结果 | 第62页 |
| ·重组 IGFBP4 目的蛋白免疫印迹鉴定结果 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-69页 |
| ·GST 亲和层析纯化目的蛋白 | 第63页 |
| ·重组蛋白纯化的总体策略 | 第63页 |
| ·蛋白纯度、得率及对目标蛋白的要求 | 第63页 |
| ·如何保持所纯化重组蛋白质的生物学活性 | 第63-64页 |
| ·如何保证蛋白质纯化的有效性 | 第64页 |
| ·分离纯化的基本原则 | 第64-65页 |
| ·可溶重组蛋白的分离纯化 | 第65-66页 |
| ·层析技术在分离纯化中的应用 | 第66-67页 |
| ·亲和标签在重组蛋白分离纯化中的应用 | 第67页 |
| ·选择亲和标签时需要考虑的因素 | 第67-69页 |
| 第四章 重组 IGFBP-4 蛋白晶体生长研究 | 第69-77页 |
| ·材料与方法 | 第69-73页 |
| ·实验材料及试剂 | 第69-72页 |
| ·实验设计 | 第72页 |
| ·实验操作步骤 | 第72-73页 |
| ·结果 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-77页 |
| ·蛋白质结晶方法 | 第74页 |
| ·蛋白结晶过程分子间的相互作用 | 第74-75页 |
| ·影响蛋白质结晶的因素 | 第75页 |
| ·蛋白质结晶的复杂性 | 第75页 |
| ·IGFBP-4 蛋白结构与功能的关系 | 第75-77页 |
| 第五章 重组 IGFBP-4 蛋白对鹿茸细胞增殖抑制的研究 | 第77-87页 |
| ·材料与方法 | 第77-82页 |
| ·材料与试剂 | 第77-79页 |
| ·实验方法 | 第79-82页 |
| ·实验结果 | 第82-83页 |
| ·倒置相差显微镜观察细胞基本形态学的变化 | 第82-83页 |
| ·IGFBP-4 对鹿茸细胞增殖的抑制作用 | 第83页 |
| ·讨论 | 第83-87页 |
| ·IGFBP-4 对细胞增殖的抑制 | 第83-84页 |
| ·原核系统进行真核基因表达的产物活性 | 第84-85页 |
| ·鹿茸细胞的选择 | 第85-86页 |
| ·台盼蓝染色法的选择 | 第86-87页 |
| 第六章 全文结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 作者简历 | 第103页 |
