| 摘要 | 第1-6页 |
| Summary | 第6-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-28页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-28页 |
| ·黄淮山羊种质特性 | 第15-16页 |
| ·骨形态发生蛋白-4（BMP-4）研究进展 | 第16-26页 |
| ·骨形态发生蛋白（BMPs）简介 | 第16-18页 |
| ·BMPs 的种类 | 第16页 |
| ·BMPs 的信号转导及调节 | 第16-17页 |
| ·BMPs 及受体的生物学作用 | 第17-18页 |
| ·BMP-4 的结构特点 | 第18-21页 |
| ·BMP-4 空间结构 | 第19-20页 |
| ·BMP-4 基因克隆与调控 | 第20-21页 |
| ·BMP-4 生物学特性 | 第21-26页 |
| ·BMP-4 的骨诱导作用 | 第21-22页 |
| ·BMP-4 在动物生殖中的作用 | 第22-24页 |
| ·BMP-4 在胚胎发育中的作用 | 第24-26页 |
| ·BMP-4 与疾病发生 | 第26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二部分 实验研究 | 第28-77页 |
| 第二章 黄淮山羊骨形态发生蛋白-4（BMP-4）基因的克隆 | 第29-54页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·试验样品 | 第29页 |
| ·仪器设备 | 第29页 |
| ·试剂盒、菌株及酶 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29-30页 |
| ·试剂配制 | 第30-31页 |
| ·方法和步骤 | 第31-39页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·BMP-4 全编码序列的扩增 | 第31-34页 |
| ·内含子2、3 及启动子部分序列的扩增 | 第34-36页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第34页 |
| ·内含子2 和3 的PCR 扩增 | 第34-35页 |
| ·启动子部分序列的PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第36页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第36-37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37-38页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37-38页 |
| ·重组体的鉴定 | 第38-39页 |
| ·β-半乳糖苷基因插入失活筛选 | 第38页 |
| ·质粒的小量制备 | 第38-39页 |
| ·滞后质粒筛选 | 第39页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒的测序 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-49页 |
| ·BMP-4 全编码序列的扩增 | 第39-41页 |
| ·肾组织总RNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·两片段的PCR 扩增 | 第40-41页 |
| ·重叠PCR 反应 | 第41页 |
| ·内含子2、3 及启动子部分序列的PCR 扩增 | 第41-43页 |
| ·血液基因组DNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·内含子2、3 的PCR 扩增 | 第42页 |
| ·启动子部分序列的PCR 扩增 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43-45页 |
| ·全长编码序列重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·内含子2 和3 重组质粒的PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·启动子部分序列重组质粒的PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·重组质粒的序列测定及分析 | 第45-48页 |
| ·全编码序列测定及其比较分析 | 第45-47页 |
| ·推导氨基酸序列及分析 | 第47-48页 |
| ·不同物种BMP-4 基因的进化分析 | 第48页 |
| ·内含子2、3 和启动子部分序列的测定 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-54页 |
| ·总RNA 的提取 | 第49-50页 |
| ·重叠PCR 反应 | 第50-51页 |
| ·血液基因组DNA 的提取 | 第51页 |
| ·基因克隆 | 第51-52页 |
| ·DNA模板 | 第52页 |
| ·T-载体 | 第52页 |
| ·BMP-4 基因序列结构分析 | 第52-54页 |
| 第三章 黄淮山羊骨形态发生蛋白-4（BMP-4）基因成熟肽的原核表达 | 第54-68页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·仪器与设备 | 第54页 |
| ·菌种与质粒 | 第54-55页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·溶液配制 | 第55-56页 |
| ·方法与步骤 | 第56-61页 |
| ·引物设计 | 第56页 |
| ·BMP-4 成熟肽的PCR 扩增 | 第56-57页 |
| ·PCR 产物及表达载体pET32a 的纯化 | 第57页 |
| ·纯化PCR 产物和pET32a 表达载体的酶切 | 第57页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第57页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第57页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第57-58页 |
| ·转化 | 第57页 |
| ·鉴定 | 第57-58页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及检测 | 第58-59页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第58页 |
| ·目的蛋白的检测 | 第58-59页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第59-60页 |
| ·适宜IPTG 浓度的确定 | 第59页 |
| ·适宜诱导温度的确定 | 第59-60页 |
| ·适宜诱导时间的确定 | 第60页 |
| ·目的蛋白的亚细胞定位 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白的提取及纯化 | 第61页 |
| ·重组蛋白的提取 | 第61页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-65页 |
| ·BMP-4 成熟肽序列的PCR 扩增 | 第61-62页 |
| ·BMP-4 成熟肽诱导表达及条件的优化 | 第62-64页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第62页 |
| ·诱导条件的优化 | 第62-64页 |
| ·BMP-4 成熟肽诱导表达蛋白的亚细胞定位 | 第64页 |
| ·BMP-4 成熟肽诱导表达蛋白的纯化 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第65-66页 |
| ·稀有密码子对蛋白表达的影响 | 第66-67页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第67页 |
| ·糖基化的影响 | 第67-68页 |
| 第四章 黄淮山羊骨形态发生蛋白-4（BMP-4）基因组织含量表达的研究 | 第68-75页 |
| ·实验材料 | 第68-69页 |
| ·试验样品 | 第68页 |
| ·仪器与设备 | 第68页 |
| ·试剂盒、菌株及酶 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·溶液配制 | 第68-69页 |
| ·方法与步骤 | 第69-72页 |
| ·引物设计 | 第69页 |
| ·组织总RNA 的提取 | 第69-70页 |
| ·RNA 电泳（甲醛变性电泳） | 第70页 |
| ·甲醛变性胶的制作 | 第70页 |
| ·RNA 模板准备 | 第70页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第70-71页 |
| ·各组织cDNA 的PCR 扩增 | 第71-72页 |
| ·结果与分析 | 第72-73页 |
| ·β-actin 和 BMP-4 基因的 PCR 扩增 | 第72页 |
| ·各组织 BMP-4 基因的相对表达量 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| ·组织特异性表达研究 | 第73-74页 |
| ·影响半定量 RT-PCR 的因素 | 第74-75页 |
| 第五章 结论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附录 | 第82-91页 |
| 导师简介 | 第91-92页 |
| 个人简介 | 第92-93页 |
