猪圆环病毒2型去除NLS ORF2基因的原核表达和琼脂扩散实验检测方法的建立
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| ·猪圆环病毒病原学研究进展 | 第11-13页 |
| ·病毒的发现 | 第11页 |
| ·病毒的理化性质 | 第11-12页 |
| ·病毒复制方式与培养特性 | 第12页 |
| ·PCV 分子生物学研究进展 | 第12-13页 |
| ·猪圆环病毒流行病学 | 第13-15页 |
| ·宿主范围和传播方式 | 第13-14页 |
| ·病毒感染现状 | 第14-15页 |
| ·致病性 | 第15页 |
| ·症状 | 第15-16页 |
| ·病理变化 | 第16页 |
| ·组织学研究 | 第16页 |
| ·血清学研究 | 第16页 |
| ·诊断方法 | 第16-18页 |
| ·电镜法 | 第17页 |
| ·免疫荧光法 | 第17页 |
| ·ELISA 诊断方法 | 第17页 |
| ·PCR 方法 | 第17-18页 |
| ·核酸探针及原位杂交方法 | 第18页 |
| ·琼脂扩散实验的研究进展 | 第18页 |
| ·课题研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-28页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·病毒 | 第20页 |
| ·细胞与实验动物 | 第20页 |
| ·原核表达载体与菌株 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·PCV2 病毒的增殖 | 第23页 |
| ·病毒DNA 提取 | 第23页 |
| ·去除NLS Cap 基因的克隆 | 第23-24页 |
| ·重组蛋白的原核表达及纯化、鉴定 | 第24-26页 |
| ·琼脂扩散实验检测方法的建立 | 第26-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-35页 |
| ·去除NLSCAP 蛋白的克隆 | 第28-29页 |
| ·去除NLSCap 基因的扩增 | 第28页 |
| ·pQE-32 载体的处理 | 第28-29页 |
| ·重组阳性质粒的酶切鉴定 | 第29页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化、鉴定 | 第29-32页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白活性鉴定 | 第30-32页 |
| ·琼脂扩散实验检测方法的建立 | 第32-35页 |
| ·琼脂扩散实验的工作条件优化 | 第32-33页 |
| ·特异性实验 | 第33页 |
| ·稳定性实验 | 第33-34页 |
| ·符合率实验 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| ·去除NLS CAP 基因的重组蛋白表达的目的 | 第35页 |
| ·原核表达条件的优势 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌表达系统研究进展 | 第35页 |
| ·表达载体 | 第35-36页 |
| ·载体的优势 | 第36页 |
| ·诱导培养基中IPTG 浓度的优化 | 第36页 |
| ·琼脂扩散实验检测PCV2 的优势 | 第36页 |
| ·影响琼脂扩散实验的因素 | 第36-38页 |
| ·琼脂板的制备 | 第36-37页 |
| ·抗原抗体浓度的影响 | 第37页 |
| ·琼脂板与平皿底部脱离对检验结果的影响 | 第37页 |
| ·琼脂板孔内表面干燥对扩散速度的影响 | 第37页 |
| ·加样的原则 | 第37-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录 | 第44-45页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第45页 |
