| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-24页 |
| ·研究目的及意义 | 第13页 |
| ·国内外研究进展 | 第13-23页 |
| ·木聚糖酶的研究进展 | 第13-17页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第17-23页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-36页 |
| ·试验材料 | 第24-27页 |
| ·菌种及载体 | 第24页 |
| ·试剂及酶类 | 第24页 |
| ·常用试剂的配制 | 第24-26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·主要试验仪器 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-36页 |
| ·里氏木霉的培养 | 第27-28页 |
| ·里氏木霉RNA的提取 | 第28页 |
| ·RNA的反转录 | 第28-29页 |
| ·里氏木霉DNA的提取 | 第29页 |
| ·木聚糖酶基因的克隆 | 第29-32页 |
| ·Xyn2基因cDNA和DNA序列的比对 | 第32页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第32页 |
| ·Xyn2原核表达产物分析 | 第32-33页 |
| ·原核表达产物的检测 | 第33页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第34-35页 |
| ·重组酵母的表达 | 第35页 |
| ·表达产物的酶学性质分析 | 第35页 |
| ·重组表达木聚糖酶酶解产物分析 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-62页 |
| ·里氏木霉的培养 | 第36-40页 |
| ·木糖标准曲线的绘制 | 第36-37页 |
| ·里氏木霉木聚糖酶诱导时间的确定 | 第37-38页 |
| ·温度和pH值对里氏木霉木聚糖酶酶活的影响 | 第38-40页 |
| ·木聚糖酶基因的克隆 | 第40-48页 |
| ·里氏木霉RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·毕赤酵母表达用xyn2基因的克隆 | 第41-43页 |
| ·原核表达用xyn2基因的克隆 | 第43-45页 |
| ·基因组DNA中xyn2基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·xyn2基因DNA序列与cDNA序列的比对 | 第46-48页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第48-51页 |
| ·原核表达载体pEK1的构建 | 第48-49页 |
| ·重组菌株BLK1的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·温度和pH值对重组菌株BLK1木聚糖酶活力的影响 | 第50-51页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第51-62页 |
| ·表达载体pPIC9多克隆位点的还原 | 第51-53页 |
| ·表达载体pPIC9Z的构建 | 第53-54页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第54-57页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第57-58页 |
| ·重组菌株的表达 | 第58-60页 |
| ·重组菌株酶活以及最适pH值和温度的测定 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| ·基因供体的选择 | 第62页 |
| ·基因表达系统的选择 | 第62-63页 |
| ·原核表达系统 | 第62-63页 |
| ·真核表达系统 | 第63页 |
| ·里氏木霉的培养 | 第63页 |
| ·木聚糖酶基因的克隆 | 第63-64页 |
| ·里氏木霉RNA的提取 | 第63-64页 |
| ·引物的设计 | 第64页 |
| ·Taq酶的选择 | 第64页 |
| ·PCR反应条件的确定 | 第64页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第64-65页 |
| ·酵母转化子的直接PCR检测 | 第65页 |
| ·不同表达系统对重组木聚糖酶性质的影响 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66-68页 |
| ·里氏木霉的培养 | 第66页 |
| ·木聚糖酶基因的克隆 | 第66页 |
| ·里氏木霉木聚糖酶基因内含子的比对 | 第66页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第66页 |
| ·xyn2基因在大肠杆菌中的表达 | 第66页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第66-67页 |
| ·xyn2基因在毕赤酵母的表达 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 附录 | 第78-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第84页 |