| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-26页 |
| ·融合基因在转基因植物中的应用 | 第11-16页 |
| ·传统获得双价转基因植物的方法 | 第11-12页 |
| ·利用融合基因获得转基因植物的方法 | 第12页 |
| ·2A和LP4作为连接多肽构建融合基因 | 第12-15页 |
| ·融合基因在转基因植物上的应用前景 | 第15-16页 |
| ·转Bt基因植物研究进展 | 第16-19页 |
| ·Bt杀虫蛋白基因 | 第16页 |
| ·Bt杀虫蛋白基因分类 | 第16-17页 |
| ·Bt杀虫蛋白的杀虫机理 | 第17页 |
| ·Bt转基因植物研究 | 第17-18页 |
| ·新型Bt杀虫基因crylAh | 第18-19页 |
| ·转EPSP合酶基因植物研究进展 | 第19-23页 |
| ·草甘膦特性 | 第19-20页 |
| ·草甘膦的生物优越性 | 第20页 |
| ·草甘膦的作用机理 | 第20-21页 |
| ·EPSP合成酶的分类 | 第21页 |
| ·EPSP合成酶的定位 | 第21-22页 |
| ·草甘膦抗性获得途径及转基因植物的研究 | 第22-23页 |
| ·转基因植物的安全性评价 | 第23-25页 |
| ·Bt转基因植物的安全性 | 第23-24页 |
| ·CP4EPSP合成酶转基因作物的安全性 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 实验材料和方法 | 第26-40页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·宿主菌 | 第26页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·各种酶及试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·实验中所用引物 | 第26-27页 |
| ·实验所用质粒 | 第27-28页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第28-29页 |
| ·培养基配制 | 第28-29页 |
| ·溶液的配制 | 第29页 |
| ·实验所需试剂配制 | 第29-31页 |
| ·质粒DNA的提取: | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·基因组DNA提取缓冲液 | 第29页 |
| ·Western杂交 | 第29-30页 |
| ·ELISA | 第30页 |
| ·抗体纯化 | 第30页 |
| ·蛋白纯化 | 第30-31页 |
| ·GUS检测液 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·对大肠杆菌的转化 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收(TIANGEN离心柱型试剂盒) | 第31-32页 |
| ·在质粒载体中进行DNA克隆 | 第32页 |
| ·碱裂解法少量提取质粒DNA | 第32-33页 |
| ·碱裂解法大量提取质粒DNA | 第33页 |
| ·根癌农杆菌转化烟草 | 第33-34页 |
| ·植物组织基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·基因组DNA的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·植物RNA的提取(Tritol提取试剂) | 第35页 |
| ·RT-PCR(Invitrogen's SuperScript~(TM)反转录酶试剂盒) | 第35-36页 |
| ·Western印迹 | 第36-37页 |
| ·ELISA | 第37页 |
| ·蛋白含量的测定(考马斯亮兰G250法) | 第37-38页 |
| ·蛋白表达的诱导 | 第38页 |
| ·蛋白纯化(镍柱) | 第38页 |
| ·抗体纯化 | 第38-39页 |
| ·转基因烟草的抗虫性测定 | 第39页 |
| ·T1烟草种发芽率的草甘膦抗性检测 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-64页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第40-49页 |
| ·单价基因载体pSAh,pSmG2的构建 | 第40页 |
| ·融合基因表达载体pHAG、pHLAG、pGAH、pGLAH的构建 | 第40-49页 |
| ·植物表达载体通过农杆菌介导法转化烟草 | 第49-50页 |
| ·植物表达载体转化根癌农杆菌LBA4404 | 第49-50页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草转化 | 第50页 |
| ·转基因烟草的分子生物学检测 | 第50-58页 |
| ·转基因烟草的GUS组织化学分析 | 第51-52页 |
| ·转基因烟草的PCR鉴定 | 第52页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·转基因烟草的Western blot检测 | 第53-57页 |
| ·转基因烟草的ELISA分析 | 第57-58页 |
| ·转基因烟草的生物活性分析 | 第58-64页 |
| ·转基因烟草的抗虫性测定 | 第58-60页 |
| ·转基因烟草的草甘膦耐受性测定 | 第60-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| ·重叠PCR在融合基因表达载体构建中的应用 | 第64页 |
| ·转基因植物的抗虫性/耐草甘膦检测方法分析 | 第64-65页 |
| ·Western blot检测方法注意事项分析 | 第65页 |
| ·正对照蛋白的诱导、纯化及确立 | 第65页 |
| ·杂交过程中条件的优化分析 | 第65页 |
| ·ELISA检测方法注意事项分析 | 第65页 |
| ·融合表达载体的分析 | 第65-66页 |
| ·连接肽2A、LP4 | 第66-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 在读期间发表论文 | 第75-76页 |
| 作者简历 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
