| 中文摘要 | 第1-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 1. 引言 | 第17-35页 |
| ·枯草芽孢杆菌224 | 第17-21页 |
| ·枯草芽孢杆菌224的一般生物学特性及其遗传背景 | 第17页 |
| ·枯草芽孢杆菌224在医学上的主要应用 | 第17-19页 |
| ·枯草芽孢杆菌224是分泌表达外源蛋白的理想宿主 | 第19-21页 |
| ·多种菌株溶血基因及其溶血素的研究进展 | 第21-28页 |
| ·大肠杆菌α溶血素 | 第21-23页 |
| ·副溶血性弧菌溶血素 | 第23-26页 |
| ·李斯特菌溶血素 | 第26-28页 |
| ·基因打靶技术 | 第28-34页 |
| ·基因打靶技术的原理 | 第28-29页 |
| ·基因打靶的策略 | 第29-30页 |
| ·基因打靶载体的构建 | 第30-31页 |
| ·影响基因打靶的因素 | 第31-32页 |
| ·基因打靶的应用 | 第32-34页 |
| ·研究的目的与意义 | 第34-35页 |
| 2. 材料 | 第35-37页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·载体 | 第35页 |
| ·酶与生化试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器和设备 | 第35-37页 |
| 3. 方法 | 第37-51页 |
| ·载体pMD18-T-neo的构建 | 第37-40页 |
| ·质粒pEGFP-N1的提取 | 第37页 |
| ·新霉素抗性基因的扩增 | 第37-38页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第38页 |
| ·PCR纯化产物与克隆载体的连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌JM109感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·重组克隆载体的转化 | 第39页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第39页 |
| ·新霉素抗性基因的序列测定与结果分析 | 第39-40页 |
| ·yhdP基因的克隆、测序及敲除研究 | 第40-44页 |
| ·枯草芽孢杆菌224染色体DNA的提取 | 第40页 |
| ·yhdP基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·yhdP基因打靶载体的构建 | 第41-43页 |
| ·枯草杆菌224感受态的制备 | 第43页 |
| ·电转化 | 第43-44页 |
| ·yhdP基因基因缺失菌株的筛选及PCR检测 | 第44页 |
| ·yhdP基因基因缺失菌株的溶血性检测 | 第44页 |
| ·yugS基因的克隆、测序及敲除研究 | 第44-47页 |
| ·yugS基因的克隆 | 第44-45页 |
| ·yugS基因打靶载体的构建 | 第45-46页 |
| ·电转化 | 第46-47页 |
| ·yugS基因基因缺失菌株的筛选及PCR检测 | 第47页 |
| ·yugS基因基因缺失菌株的溶血性检测 | 第47页 |
| ·yhdT基因的克隆、测序及敲除研究 | 第47-49页 |
| ·yhdT基因的克隆 | 第47页 |
| ·yhdT基因打靶载体的构建 | 第47-48页 |
| ·电转化 | 第48页 |
| ·yhdT基因基因缺失菌株的筛选及PCR检测 | 第48-49页 |
| ·yhdT基因基因缺失菌株的溶血性检测 | 第49页 |
| ·yqhB基因的克隆、测序及敲除研究 | 第49-51页 |
| ·yqhB基因的克隆 | 第49页 |
| ·yqhB基因打靶载体的构建 | 第49-50页 |
| ·电转化 | 第50页 |
| ·yqhB基因基因缺失菌株的筛选及PCR检测 | 第50页 |
| ·yqhB基因基因缺失菌株的溶血性检测 | 第50-51页 |
| 4. 实验结果 | 第51-72页 |
| ·载体pMD18-T-neo的构建 | 第51-52页 |
| ·新霉素抗性基因的扩增 | 第51页 |
| ·重组克隆质粒pMD18-T-neo的鉴定 | 第51页 |
| ·新霉素抗性基因序列测定与结果分析 | 第51-52页 |
| ·yhdP基因的克隆、测序及敲除研究 | 第52-57页 |
| ·枯草芽孢杆菌224染色体DNA的提取 | 第52-53页 |
| ·yhdP基因的克隆 | 第53页 |
| ·yhdP基因同源臂的克隆 | 第53-55页 |
| ·yhdP基因打靶载体的构建 | 第55页 |
| ·yhdP基因缺失菌株的筛选及PCR检测 | 第55-56页 |
| ·yhdP基因缺失菌株的核苷酸验证 | 第56页 |
| ·yhdP基因缺失菌株的溶血性检测 | 第56-57页 |
| ·yugS基因的克隆、测序及敲除研究 | 第57-62页 |
| ·yugS基因的克隆 | 第57-58页 |
| ·yugS基因同源臂的克隆 | 第58页 |
| ·yugS基因打靶载体的构建 | 第58-60页 |
| ·yugS基因缺失菌株的筛选及PCR检测 | 第60-61页 |
| ·yugS基因缺失的核苷酸序列验证 | 第61页 |
| ·yugS基因缺失菌株的溶血性检测 | 第61-62页 |
| ·yhdT基因的克隆、测序及敲除研究 | 第62-67页 |
| ·yhdT基因的克隆 | 第62页 |
| ·yhdT基因同源臂的克隆 | 第62-63页 |
| ·yhdT基因打靶载体的构建 | 第63-65页 |
| ·yhdT基因缺失菌株的筛选及PCR检测 | 第65页 |
| ·yhdT基因缺失的核苷酸序列验证 | 第65-66页 |
| ·yhdT基因缺失菌株的溶血性检测 | 第66-67页 |
| ·yqhB基因的克隆、测序及敲除研究 | 第67-72页 |
| ·yqhB基因的克隆 | 第67页 |
| ·yqhB基因同源臂的克隆 | 第67-69页 |
| ·yqhB基因打靶载体的构建 | 第69页 |
| ·yqhB基因缺失菌株的筛选及PCR检测 | 第69-70页 |
| ·yqhB基因缺失的核苷酸序列验证 | 第70页 |
| ·yqhB基因缺失菌株的溶血性检测 | 第70-72页 |
| 5. 讨论 | 第72-77页 |
| ·枯草芽孢杆菌224染色体DNA的提取 | 第72页 |
| ·基因打靶载体的构建 | 第72-74页 |
| ·打靶载体的骨架质粒pMD18-T-neo的构建 | 第72-73页 |
| ·靶基因同源臂的克隆 | 第73-74页 |
| ·同源臂连入打靶载体 | 第74页 |
| ·外源DNA导入宿主细胞方式的选择 | 第74-75页 |
| ·阳性重组子的筛选与鉴定 | 第75-76页 |
| ·四个基因yhdP、yugS、yhdT、yqhB与溶血性的关系 | 第76-77页 |
| 6. 结论 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 附录A | 第89-90页 |
| 附录B | 第90-91页 |
| 附录C | 第91-92页 |
| 附录D | 第92-93页 |
| 附录E | 第93-94页 |
| 附录F | 第94-95页 |
| 附录G | 第95-96页 |
| 附录H | 第96-97页 |
| 附录I | 第97-98页 |
| 附录J | 第98-100页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第100页 |