| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| 1 拟南芥简述 | 第10页 |
| 2 植物细胞信号转导途径概述 | 第10-11页 |
| 3 植物的抗病方面的研究 | 第11-18页 |
| ·病原菌和植物的相互关系 | 第11-12页 |
| ·"基因对基因"假说 | 第12-13页 |
| ·系统获得性抗性(Systemic Acquires Resistance) | 第13-16页 |
| ·SAR的发生机制 | 第13-15页 |
| ·SA的作用和合成途径 | 第15页 |
| ·SA上游的调控 | 第15-16页 |
| ·SA下游的信号 | 第16页 |
| ·snc1信号途径 | 第16-18页 |
| 4 植物基因工程与功能基因组研究 | 第18-20页 |
| 5 前期研究工作 | 第20-22页 |
| 第二章 突变基因的确定 | 第22-29页 |
| 1 材料与方法 | 第22-24页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·培养基和无菌土壤 | 第22页 |
| ·试剂和酶 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·拟南芥的种植及其生长条件 | 第23页 |
| ·DNA水平验证 | 第23页 |
| ·cDNA的获得 | 第23-24页 |
| ·Real-time PCR检验目的基因的表达情况 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-28页 |
| ·突变体表型 | 第24-25页 |
| ·DNA水平上的验证结果 | 第25-26页 |
| ·RNA的浓度及质量检测 | 第26-27页 |
| ·RNA的浓度和质量 | 第26-27页 |
| ·cDNA的质量检测 | 第27页 |
| ·Real Time PCR的结果及分析 | 第27-28页 |
| 3 讨论与结论 | 第28-29页 |
| 第三章 目的基因的克隆与功能互补实验 | 第29-40页 |
| 1 材料与方法 | 第30-33页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·酶和试剂盒 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-33页 |
| ·拟南芥的种植及其生长条件 | 第30-31页 |
| ·野生型基因组DNA的获得与片段的扩增PCR和回收 | 第31页 |
| ·片段和载体的酶切和回收 | 第31页 |
| ·片段和载体的连接与电激转化大肠杆菌 | 第31页 |
| ·阳性克隆的筛选和酶切及测序鉴定 | 第31-32页 |
| ·二元穿梭重组质粒的构建 | 第32页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第32页 |
| ·双元载体系统转化植物 | 第32页 |
| ·转基因植物纯合子的筛选 | 第32-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-39页 |
| ·BG基因重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·SG基因重组质粒的构建 | 第34-36页 |
| ·二元穿梭重组质粒的获得及酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·二元穿梭重组质粒的获得 | 第36页 |
| ·二元穿梭重组质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·转基因植物的获得及鉴定 | 第37-39页 |
| ·转基因植物的获得 | 第37-39页 |
| ·转基因植物的鉴定 | 第39页 |
| 3 讨论与结论 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第39页 |
| ·结论 | 第39-40页 |
| 第四章 BG基因的过表达实验 | 第40-46页 |
| 1 材料与方法 | 第41-43页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·植物材料 | 第41页 |
| ·质粒和菌株 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·酶和试剂盒 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·拟南芥的种植及其生长条件 | 第41页 |
| ·BG cDNA的获得 | 第41-42页 |
| ·过表达载体pGreen ST1-BG_cDNA的构建 | 第42页 |
| ·转基因植物的获得 | 第42页 |
| ·pCAMBIA1300-BG在野生型Col-0中的过表达。 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-45页 |
| ·BG cDNA的获得与鉴定 | 第43-44页 |
| ·BG_cDNA1的获得与鉴定 | 第43页 |
| ·BG_cDNA2的获得与鉴定 | 第43-44页 |
| ·BG_cDNA的获得与鉴定 | 第44页 |
| ·过表达重组质粒的构建及检测 | 第44-45页 |
| ·转基因植物的表型分析 | 第45页 |
| ·转基因植物的鉴定 | 第45页 |
| ·Col-BG_cDNA转基因植物的表型分析 | 第45页 |
| ·Col-BG转基因植物的表型分析 | 第45页 |
| 3 讨论与结论 | 第45-46页 |
| 第五章 编码蛋白的表达及结构和功能分析 | 第46-55页 |
| 1 材料与方法 | 第47-50页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·植物材料 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·酶和试剂盒 | 第47-48页 |
| ·质粒和菌株 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·拟南芥的种植及其生长条件 | 第48页 |
| ·目的蛋白的原核表达 | 第48-49页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第49页 |
| ·目的蛋白在植物体内的表达Western Blot检测 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-53页 |
| ·目的蛋白的原核表达及纯化 | 第50-52页 |
| ·原核表达重组质粒的获得与鉴定 | 第50-51页 |
| ·目的蛋白的原核表达 | 第51页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| ·目的蛋白的体内检测 | 第52-53页 |
| ·pCAMBIA1305-BG-HA的构建及鉴定 | 第52页 |
| ·转基因植物的获得 | 第52-53页 |
| ·Western Blot检测 | 第53页 |
| 3 讨论与结论 | 第53-55页 |
| 第六章 编码蛋白的亚细胞定位 | 第55-62页 |
| 1 材料与方法 | 第56-58页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·酶和试剂盒 | 第56页 |
| ·质粒和菌株 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-58页 |
| ·拟南芥的种植及其生长条件 | 第57页 |
| ·C-末端含GFP-tag重组质粒pCAMBIA1305-BG-cGPP的构建 | 第57页 |
| ·N-末端含GFP-tag重组质粒pCAMBIA1300-nGFP-BG的构建 | 第57页 |
| ·转基因植物的筛选 | 第57-58页 |
| ·转基因植物的GFP检测 | 第58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-61页 |
| ·目的基因C-端GFP转基因植物的获得 | 第58-59页 |
| ·pCAMBIA1305-BG-cGFP的构建及鉴定 | 第58页 |
| ·C-端GFP转基因植物的筛选 | 第58-59页 |
| ·目的基因N-端GFP转基因植物的获得 | 第59-60页 |
| ·pCAMBIA1300-nCFP-BC的构建及鉴定 | 第59-60页 |
| ·C-端GFP转基因植物的筛选 | 第60页 |
| ·转基因植物中GFP的定位 | 第60-61页 |
| ·T1代转基因植物中GFP的检测 | 第60-61页 |
| ·Comfocal检测Col-BG-GFP纯合子目的蛋白与细胞核的共定位 | 第61页 |
| 3 讨论与结论 | 第61-62页 |
| 第七章 突变体抗病功能研究 | 第62-68页 |
| 1 材料与方法 | 第62-64页 |
| ·实验材料 | 第62-63页 |
| ·植物材料 | 第62页 |
| ·培养基 | 第62页 |
| ·酶和试剂盒 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-64页 |
| ·P.s.m.ES4326感染植物 | 第63页 |
| ·P.p.NOCO2感染植物 | 第63页 |
| ·Real time PCR检测PR1和PR2基因的表达 | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-67页 |
| ·各个突变体对P.s.m.ES4326的抗性 | 第64页 |
| ·各个突变体对P.p.NOCO2的抗性 | 第64-65页 |
| ·各种植物在RNA水平上PR1和PR2基因的表达情况 | 第65-67页 |
| 3 讨论与结论 | 第67-68页 |
| 结论和下一步研究 | 第68-71页 |
| 1 总结 | 第68页 |
| 2 假说与模型 | 第68-70页 |
| 3 进一步研究工作展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 附录A pSKI015质粒图谱 | 第76页 |
| 附录B pBluescritp Ⅱ SK(+)质粒图谱 | 第76-77页 |
| 附录C pCAMBIA1300质粒图谱 | 第77页 |
| 附录D pGreen0229系列质粒图谱 | 第77-78页 |
| 附录E pCAMBIA1305质粒图谱 | 第78页 |
| 附录F pET-24a载体图谱 | 第78-79页 |
| 符号表 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简历 | 第81页 |
