| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| ·RNA 介导病毒抗性 | 第11-13页 |
| ·RNA 介导病毒抗性的提出 | 第11-12页 |
| ·RNA 介导病毒抗性的特点和性质 | 第12页 |
| ·RNAi 作用机制 | 第12-13页 |
| ·hpRNA 与RNAi | 第13页 |
| ·选择标记基因 | 第13-14页 |
| ·选择标记基因的使用 | 第13页 |
| ·选择标记基因的安全性问题 | 第13-14页 |
| ·提高标记基因安全性的策略 | 第14-18页 |
| ·选用生物安全的标记基因 | 第14-15页 |
| ·无抗性标记转基因植物的获得 | 第15-18页 |
| ·本研究的立题依据和主要研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-36页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·毒源 | 第19页 |
| ·供试植物 | 第19页 |
| ·菌株、质粒 | 第19页 |
| ·常用缓冲液及培养基的配制 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-36页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·不同目的片段的扩增 | 第20页 |
| ·双T-DNA RNAi 植物表达载体的构建 | 第20-25页 |
| ·重组质粒向农杆菌转化（冻融法） | 第25页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第25-26页 |
| ·植物总DNA 的提取（苯酚法） | 第26页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第26-27页 |
| ·转基因植株潮霉素抗性的快速检测 | 第27页 |
| ·Sorthern blot 分析 | 第27-29页 |
| ·转基因植株总 RNA 的提取(Trizol 一步提取法) | 第29页 |
| ·Northern blot 分析 | 第29-33页 |
| ·转基因植株 siRNA 的提取及杂交分析 | 第33-35页 |
| ·转基因植株的抗病性分析 | 第35页 |
| ·转基因植株的田间抗虫性鉴定 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-49页 |
| ·双T-DNA 植物表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·Nos-LB-RB 片段的扩增 | 第36页 |
| ·Nos-LB-RB 片段和载体的连接及菌落PCR 鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组中间载体酶切鉴定 | 第37页 |
| ·Ubi 启动子的扩增 | 第37页 |
| ·中间载体和Ubi 启动子的连接及菌落PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组载体酶切鉴定 | 第38页 |
| ·双T-DNA RNAi 植物表达载体的构建 | 第38-42页 |
| ·目的片段的扩增 | 第38-39页 |
| ·RSV SP 片段正向插入载体及菌液PCR 鉴定 | 第39页 |
| ·重组载体酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·内含子与重组载体的连接及菌液PCR 鉴定 | 第40页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第40-41页 |
| ·RSV SP 片段反向插入重组载体及菌液 PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·重组载体酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·T0 代转基因植株的获得 | 第42-44页 |
| ·T0 代转基因植株的潮霉素抗性鉴定及PCR 检测 | 第43-44页 |
| ·T1 代转基因的潮霉素抗性鉴定及转基因的PCR 检测 | 第44-45页 |
| ·T2 代转基因的分析鉴定 | 第45-49页 |
| ·T2 代转基因的PCR 检测 | 第45页 |
| ·T2 代转基因的RSV 抗性鉴定 | 第45-46页 |
| ·T2 代转基因的Southern 杂交分析 | 第46-47页 |
| ·T2 代转基因的Northern blot 及SiRNA 杂交分析 | 第47-48页 |
| ·T2 代转基因植株的田间抗虫性鉴定 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录常用缓冲液及培养基的配制 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第65-66页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第66页 |
