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猪FoxO1基因cDNA的克隆及对前体脂肪细胞和成肌细胞分化的调控作用

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
第一部分 文献综述第14-42页
 第一章 脂肪细胞的分化及调控第14-22页
   ·脂肪细胞的起源第14页
   ·脂肪细胞的分化过程第14-16页
   ·脂肪细胞分化过程的转录调控第16-18页
   ·脂肪细胞分化过程中的信号通路第18-21页
     ·MIX 诱导的信号通路第18页
     ·DEX 诱导的信号通路第18页
     ·IGF-1R 介导的信号通路第18-21页
   ·脂肪细胞分化研究中存在的问题第21页
   ·研究脂肪细胞分化的重要意义第21-22页
 第二章 成肌细胞分化及调控第22-29页
   ·成肌细胞分化的基本过程第22-23页
     ·成肌表型分化第22-23页
     ·肌分化过程中的细胞凋亡第23页
   ·几种重要的肌决定因子第23-26页
     ·成肌特异的bHLH 转录因子第23-25页
     ·其他重要的成肌特异因子第25-26页
   ·肌决定因子的调控物第26-27页
     ·IGF 和IGFBP第26页
     ·Notch第26页
     ·孤核受体第26-27页
     ·其他参与调控成肌因子的蛋白第27页
   ·细胞周期调控第27-29页
     ·p21第28页
     ·pRb第28页
     ·Cyclin-cdk第28-29页
 第三章 FOXO1 的生理功能及其影响肥胖症和肌萎缩的重要机制第29-42页
   ·FOXO 转录因子的结构与基因表达第29-30页
     ·FOX 蛋白的命名和分类第29页
     ·FOXO 及基因表达第29-30页
   ·FOXO 转录因子活性的调节第30-31页
     ·FOXO 蛋白的共价修饰第30-31页
     ·FOXO 蛋白的降解第31页
     ·FOXO 蛋白与其他蛋白的相互作用第31页
   ·FOXO 转录因子的靶基因及其相关的生物学功能第31-34页
     ·FOXO 参与细胞代谢调节第31-32页
     ·FOXO 参与细胞周期及凋亡的调节第32-33页
     ·FOXO 与肿瘤的发生第33-34页
   ·FOXO1 影响肥胖症和肌萎缩的重要机制第34-42页
     ·FOXO 的结构和调节第34-35页
     ·Foxo1 在肝脏中调节多条代谢通路第35-37页
     ·Foxo1 影响胰岛β细胞的衰竭和增生第37-38页
     ·Foxo1 与脂肪细胞增殖与分化的关系第38-39页
     ·Foxo1 与成肌细胞分化关系第39-42页
第二部分 实验研究第42-131页
 前言第42-45页
 第四章 猪FOXO1 基因CDNA 克隆、序列分析及其蛋白功能预测第45-66页
   ·材料与方法第45-53页
     ·材料第45-47页
     ·方法与步骤第47-53页
   ·结果与分析第53-61页
     ·猪肝脏和皮下脂肪组织RNA 提取第53页
     ·猪FoxO1 基因cDNA CDS 部分序列RT-PCR 结果第53页
     ·猪FoxO1 基因RACE 和克隆测序第53-54页
     ·猪FoxO1 基因cDNA 序列分析第54-55页
     ·猪FoxO1 氨基酸序列序列分析第55-58页
     ·猪FoxO1 蛋白结构功能预测第58-61页
     ·猪FoxO1 mRNA 的二级结构分析第61页
   ·讨论第61-65页
     ·关于RACE 技术第62-64页
     ·猪FoxO1 结构和功能的预测第64-65页
   ·小结第65-66页
 第五章 猪FOXO1 基因染色体定位与组织表达研究第66-80页
   ·材料与方法第66-72页
     ·实验材料第66-67页
     ·实验方法第67-72页
   ·结果与分析第72-76页
     ·猪FoxO1 基因的物理定位结果第72-73页
     ·Realtime PCR 检测不同日龄猪各组织表达结果第73-75页
     ·免疫印迹分析第75-76页
   ·讨论第76-79页
     ·基因的染色体定位第76-77页
     ·Realtime PCR 检测FoxO1 基因转录表达第77-79页
     ·免疫印迹分析第79页
     ·FoxO1 基因组织表达与脂肪沉积和肌肉发育第79页
   ·小结第79-80页
 第六章 白藜芦醇和IGF-1 调控猪原代前体脂肪细胞增殖与分化及其机理第80-92页
   ·材料与方法第80-83页
     ·实验材料第80-82页
     ·实验方法第82-83页
   ·结果与分析第83-89页
     ·脂肪细胞形态学变化第83-84页
     ·RES 对猪前体脂肪细胞增殖的影响第84-85页
     ·RES 对猪前体脂肪细胞分化的影响第85-86页
     ·RES 对猪前体脂肪细胞分化中FoxO1、Sirt1 和PPARγ时序表达的影响第86页
     ·IGF-1 对猪前体脂肪细胞增殖的影响第86-87页
     ·IGF-1 对猪前体脂肪细胞分化的影响第87-88页
     ·IGF-1 对猪前体脂肪细胞分化中FoxO1、Sirt1 和PPARγ时序表达的影响第88-89页
   ·讨论第89-91页
     ·RES 对猪脂肪细胞增殖与分化的时效关系第89页
     ·IGF-1 对猪脂肪细胞增殖与分化的时效关系第89-90页
     ·RES 抑制猪脂肪细胞增殖与分化可能机理第90页
     ·IGF-1 抑制猪脂肪细胞增殖与分化可能机理第90-91页
   ·小结第91-92页
 第七章 RES 和IGF-1 对猪成肌细胞增殖与分化的影响及其机理第92-103页
   ·材料和方法第92-95页
     ·实验材料第92-93页
     ·实验方法第93-95页
   ·结果与分析第95-100页
     ·成肌细胞存活率测定第95-96页
     ·RES 和IGF-1 处理成肌细胞后的形态学变化第96-97页
     ·RES 和IGF-1 对猪成肌细胞增殖的影响第97-98页
     ·RES 和IGF-1 对猪成肌细胞融合的影响第98页
     ·RES 和IGF-1 对猪成肌细胞增殖分化中FoxO1 和MyoD 表达时序的影响第98-100页
   ·讨论第100-102页
     ·猪原代成肌细胞培养与鉴定第100页
     ·RES 和IGF-1 对猪原代成肌细胞增殖的影响第100-101页
     ·RES 和IGF-1 对猪原代成肌细胞融合的影响第101页
     ·RES 和IGF-1 对猪原代成肌细胞增殖与分化的可能机理第101-102页
   ·小结第102-103页
 第八章 猪FOXO1 基因 SIRNAS 的设计及其稳定表达载体的构建第103-116页
   ·材料和方法第103-108页
     ·材料与试剂第103-104页
     ·实验方法第104-108页
   ·实验结果第108-113页
     ·FoxO1 干扰载体的构建第108-109页
     ·磷酸钙法和脂质体法转染细胞效率比较第109-111页
     ·RT-PCR 检测第111-112页
     ·FoxO1 免疫荧光分析第112-113页
   ·讨论第113-115页
     ·猪脂肪细胞和成肌细胞转染方法的确定第113页
     ·siRNA 引物的设计与干扰载体的构建第113-114页
     ·转染猪前体脂肪细胞和成肌细胞的抑制效果第114-115页
   ·小结第115-116页
 第九章 FOXO1 调控猪成脂和成肌相关基因的时序表达第116-131页
   ·材料与方法第117-119页
     ·实验材料第117页
     ·实验方法第117-119页
   ·结果与分析第119-126页
     ·脂肪细胞形态学变化第119-121页
     ·FoxO1 RNAi 对猪原代前体脂肪细胞成脂相关基因的时序表达第121-123页
     ·成肌细胞分化过程中形态学变化第123-124页
     ·FoxO1 RNAi 对猪成肌细胞成肌相关基因的时序表达第124-126页
   ·讨论第126-130页
     ·转染重组质粒后细胞形态的变化第126页
     ·RNAi 抑制细胞内源FoxO1 表达第126-127页
     ·FoxO1 调控猪前体脂肪细胞关键基因的时序表达第127-128页
     ·FoxO1 调控猪成肌细胞关键基因的时序表达第128-130页
   ·小结第130-131页
结论第131-133页
参考文献第133-148页
缩略词表第148-150页
致谢第150-151页
作者简介第151-152页

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