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山核桃分子标记与开花基因CcLFY及其启动子克隆的研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-9页
缩写词英汉对照第9-15页
引言第15-17页
1 文献综述第17-49页
   ·山核桃研究简况第17-25页
     ·山核桃生物学特性研究第18-19页
     ·山核桃高效培育技术研究第19-21页
     ·山核桃连年丰产技术研究第21-23页
     ·山核桃生产上存在的问题及研究展望第23-25页
   ·分子标记技术研究进展第25-28页
   ·植物成花基因研究进展第28-42页
     ·植物成花相关基因研究进展第29-34页
       ·控制成花转变的路径第29-31页
       ·植物花发育的基因第31-34页
     ·LFY 同源基因的研究进展第34-42页
       ·LFY 同源基因的克隆与结构分析第34-37页
       ·LFY 同源基因的时空表达第37-38页
       ·LFY 基因在成花各阶段中的作用第38-40页
       ·与 LFY 基因相关的基因调控网络第40-41页
       ·影响 LFY 基因表达的生理因子第41-42页
   ·植物启动子研究进展第42-46页
     ·植物基因启动子的一般特征第43页
       ·转录起始位点第43页
       ·TATA-box第43页
       ·G-box第43页
       ·CAAT box第43页
     ·植物组织特异性启动子第43-46页
       ·根特异性表达启动子第44页
       ·茎特异性表达启动子第44-45页
       ·叶特异性表达启动子第45页
       ·花粉(花药)特异性启动子第45页
       ·果实、种子特异性启动子第45-46页
       ·维管束特异性表达启动子第46页
   ·讨论第46-47页
   ·本研究的总体思路第47-49页
2 山核桃种群 RAPD 分析第49-71页
   ·实验材料与方法第49-54页
     ·实验材料第49-52页
       ·实验试剂第49页
       ·实验材料第49-52页
     ·实验方法第52-54页
       ·山核桃基因组 DNA 提取及检测第52页
       ·RAPD 反应体系优化第52-53页
       ·引物筛选第53-54页
       ·山核桃属植物种间亲缘关系 RAPD 分析第54页
       ·山核桃种群遗传多样性 RAPD 分析第54页
       ·大别山山核桃种群遗传多样性 RAPD 分析第54页
       ·数据处理与统计分析第54页
   ·结果与分析第54-68页
     ·基因组 DNA 提取方法比较第54-55页
     ·PCR 反应体系及条件优化第55-57页
       ·Taq 酶、dNTP、引物浓度试验第55页
       ·Mg~(2+)、DNA 模板浓度筛选第55-56页
       ·增效剂 BSA 和 TmAc 筛选第56页
       ·循环扩增条件筛选第56-57页
     ·RAPD 引物筛选第57-59页
     ·山核桃属种间 RAPD 结果第59-61页
       ·RAPD 多态性分析第60页
       ·遗传距离聚类分析第60-61页
     ·山核桃种群 RAPD 结果第61-65页
       ·多态位点百分比及其分布第61-63页
       ·Shannon 表型多样性指数第63-64页
       ·种群遗传分化指数第64页
       ·种群间遗传一致度和遗传距离第64-65页
     ·大别山山核桃种群 RAPD 结果第65-68页
       ·多态位点百分比及其分布第65-66页
       ·不同种群的遗传多样性第66-67页
       ·种群间遗传一致度和遗传距离第67-68页
   ·讨论第68-71页
3 山核桃与薄壳山核桃授粉子代 AFLP 分析第71-81页
   ·实验材料与方法第71-78页
     ·实验材料第71-73页
       ·AFLP 实验材料第71-72页
       ·AFLP 实验试剂第72-73页
     ·实验方法第73-78页
       ·子代果实质量测定第73页
       ·子代果实品质测定第73-75页
       ·子代AFLP 实验第75-78页
   ·结果与分析第78-80页
     ·授粉子代品质性状分析第78-79页
     ·AFLP 实验结果第79-80页
   ·讨论第80-81页
4 山核桃开花基因 CcLFY 克隆第81-121页
   ·实验材料与方法第81-99页
     ·实验材料第81-82页
       ·实验材料第81-82页
       ·酶和试剂第82页
       ·引物合成和序列测定第82页
     ·实验方法第82-99页
       ·采样时间的确定第82页
       ·山核桃CcLFY 基因片段的克隆第82-84页
       ·山核桃CcLFY 基因3’端序列第84-91页
       ·山核桃CcLFY 基因5’端序列第91-94页
       ·山核桃CcLFY 基因全长cDNA第94-95页
       ·山核桃CcLFY 基因转录区序列第95-96页
       ·Southern Blotting 分析第96-99页
   ·结果与分析第99-119页
     ·雌花芽分化过程中的显微观察第99页
     ·山核桃基因组DNA 提取第99-100页
     ·山核桃CcLFY 基因阳性片段第100-103页
       ·PCR 扩增结果第100页
       ·序列测定与分析第100-103页
     ·RNA 提取第103-104页
     ·mRNA 的纯化第104-105页
     ·3’端序列第105页
     ·5’端序列第105-107页
     ·cDNA 完整开放阅读框第107-109页
     ·山核桃CcLFY 基因的结构分析第109-114页
     ·CcLFY 基因转录区序列第114-118页
     ·Southern Blotting 结果第118-119页
   ·讨论第119-121页
5 山核桃CcLFY 基因时空表达与表达载体构建第121-133页
   ·实验材料与方法第121-127页
     ·实验材料第121-122页
       ·植物材料第121页
       ·质粒和菌株第121页
       ·酶和试剂第121-122页
     ·实验方法第122-127页
       ·CcLFY 基因空间表达分析第122-124页
       ·CcLFY 基因表达载体的构建第124-126页
       ·叶盘法转化烟草外植体第126-127页
   ·结果与分析第127-130页
     ·CcLFY 基因空间表达特性研究第127-128页
     ·CcLFY 基因表达载体的构建第128-130页
       ·中间载体的构建第128页
       ·CcLFY 基因表达载体构建第128-129页
       ·CcLFY 基因表达载体的鉴定第129页
       ·表达载体的农杆菌转化第129页
       ·转基因烟草植株的培育第129-130页
   ·讨论第130-133页
6 山核桃 CcLFY 基因启动子克隆与瞬时表达分析第133-147页
   ·材料与方法第133-139页
     ·试验材料第133-134页
       ·植物材料与试剂第133页
       ·菌种与载体第133-134页
     ·试验方法第134-139页
       ·山核桃 CcLFY 基因启动子克隆与序列分析第134-137页
       ·山核桃 CcLFY 基因启动子表达载体的构建第137-138页
       ·山核桃 CcLFY 基因启动子瞬时表达分析第138-139页
   ·结果与分析第139-146页
     ·山核桃 CcLFY 基因启动子克隆与序列分析第139-142页
       ·第一次步移结果第139-140页
       ·第二次步移第140页
       ·第三次步移第140页
       ·全长启动子的扩增结果第140页
       ·启动子序列分析第140-142页
       ·顺式作用元件的分析第142页
     ·CcLFY 基因启动子表达载体的构建第142-144页
       ·中间载体的构建第142页
       ·表达载体的构建第142页
       ·表达载体的鉴定第142-144页
     ·CcLFY 基因启动子表达载体转入农杆菌第144-145页
     ·CcLFY 基因启动子瞬时表达第145-146页
   ·讨论第146-147页
7 结论第147-149页
   ·结论第147-148页
   ·后续研究计划第148-149页
参考文献第149-159页
附录1第159-161页
附录2第161-163页
附录3第163-165页
附录4第165-169页
个人简介第169-171页
导师简介1第171-173页
导师简介2第173-175页
成果目录清单第175-177页
致谢第177页

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