| 摘要 | 第1-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第8-29页 |
| 1 体外诱变 | 第8-18页 |
| ·什么是体外诱变 | 第8页 |
| ·体外诱变的研究进展 | 第8-15页 |
| ·体外诱变的选择策略 | 第15页 |
| ·体外诱变在微生物酶领域已经取得的成绩 | 第15-18页 |
| 2 α-淀粉酶 | 第18-23页 |
| ·α-淀粉酶的简介 | 第18页 |
| ·α-淀粉酶的研究进展 | 第18-20页 |
| ·α-淀粉酶的结构特征 | 第20-22页 |
| ·α-淀粉酶的催化机制 | 第22-23页 |
| 3 巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统 | 第23-29页 |
| ·Pichia pastoris表达系统的研究概况 | 第23-24页 |
| ·Pichia pastoris表达系统的优缺点 | 第24页 |
| ·Pichia pastoris表达系统的应用 | 第24-25页 |
| ·影响Pichia pastoris中外源蛋白表达的因素 | 第25-27页 |
| ·Pichia pastoris表达系统应用前景 | 第27-29页 |
| 第二部分 引言 | 第29-30页 |
| 第三部分 α-淀粉酶基因的体外诱变及筛选 | 第30-45页 |
| 1 材料与方法 | 第30-35页 |
| ·菌种和质粒 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·试验用溶液的配制 | 第31-32页 |
| ·PCR反应系列试剂 | 第32页 |
| ·酶与标准分子量 | 第32页 |
| ·试验仪器和设备 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-42页 |
| ·5-BrdUTP代替dTTP进行α-淀粉酶基因体外诱变条件的选择 | 第35页 |
| ·重组载体的构建 | 第35-36页 |
| ·高酶活转化子的筛选 | 第36-40页 |
| ·编码高酶活α-淀粉酶基因的测序 | 第40页 |
| ·高酶活基因的表达产物的分析 | 第40页 |
| ·编码高酶活α-淀粉酶基因的突变位点分析 | 第40-41页 |
| ·高酶活基因突变氨基酸空间位置分析 | 第41-42页 |
| 3 结论与讨论 | 第42-45页 |
| ·结论 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| 第四部分 野油菜黄单胞菌α-淀粉酶基因在毕赤酵母中表达 | 第45-55页 |
| 1 实验材料与方法 | 第45-46页 |
| ·菌株和质粒 | 第45页 |
| ·PCR引物 | 第45页 |
| ·限制性内切酶和主要试剂 | 第45页 |
| ·培养基和溶液 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-52页 |
| ·表达载体的构建及鉴定 | 第46-48页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选 | 第48-49页 |
| ·重组毕赤酵母的诱导表达 | 第49-51页 |
| ·重组毕赤酵母的酶学性质 | 第51-52页 |
| 3 结论与讨论 | 第52-55页 |
| ·结论 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| ABSTRACT | 第65-66页 |
| 附录Ⅰ: | 第66-70页 |
| 附录Ⅱ: | 第70-72页 |
