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长筒石蒜花瓣cDNA文库构建与表达序列标签(ESTs)分析

致谢第1-3页
摘要第3-5页
Abstract第5-7页
缩略词表第7-11页
第一章 文献综述第11-37页
 1 石蒜属植物概况第11-15页
   ·石蒜属植物的生物学特性第12页
   ·中国石蒜属植物的种类及分布第12-13页
   ·石蒜属植物花色、花型变异第13-15页
   ·石蒜属植物资源的经济价值及开发利用第15页
 2 植物花发育相关基因的研究进展第15-24页
   ·植物成花机理第15-20页
     ·成花诱导过程第16-17页
     ·花序分生组织的形成第17-18页
     ·花分生组织的形成第18-19页
     ·花器官原基的形成第19-20页
   ·花色调控机理第20-24页
 3 基因文库第24-29页
   ·基因组文库和cDNA 文库第24-25页
   ·cDNA 文库的载体系统第25-26页
   ·构建cDNA 文库的方法第26-28页
     ·差减cDNA 文库第26-27页
     ·标准化cDNA 文库第27页
     ·标准化差减cDNA 文库第27页
     ·cDNA PCR 文库和RACE cDNA 文库第27-28页
   ·cDNA 文库的质量第28-29页
   ·cDNA 文库的应用第29页
     ·筛选与性状相关的重要基因第29页
     ·结合芯片技术对生物体基因的时空表达进行研究第29页
     ·为EST 的开发提供材料第29页
 4 EST 技术及其应用第29-35页
   ·EST 及其研究概况第29-30页
   ·EST 技术的原理和方法第30-31页
   ·EST 的应用第31-34页
     ·构建遗传学图谱第31-32页
     ·分离与鉴定新基因第32页
     ·基因差异表达的研究第32-33页
     ·比较基因组学研究第33页
     ·用于制备DNA 芯片第33-34页
   ·生物信息学在EST 技术中的应用第34-35页
     ·EST 数据库第34页
     ·EST 序列分析软件第34-35页
   ·花卉EST 研究第35页
 5 本研究的目的意义和思路第35-37页
第二章 长筒石蒜花瓣cDNA 文库构建第37-54页
 1 实验材料与方法第37-45页
   ·植物材料第37-38页
   ·样品采集第38页
   ·实验试剂与仪器设备第38-39页
     ·试剂第38-39页
     ·仪器设备第39页
   ·实验方法第39-45页
     ·长筒石蒜花瓣总mRNA 的提取第39-40页
     ·mRNA 的分离与纯化第40-41页
     ·第一链cDNA 的合成第41-42页
     ·第二链cDNA 的合成第42页
     ·cDNA 末端补平第42页
     ·EcoR I 接头的连接第42-43页
     ·EcoR I 末端磷酸化第43页
     ·用Xh01 限制性内切酶消化第43页
     ·cDNA 大小片段筛选第43-44页
     ·cDNA 与质粒载体相连第44页
     ·连接产物纯化第44页
     ·转化宿主菌第44页
     ·文库滴度测定第44页
     ·插入片段大小检测第44-45页
 2 实验结果第45-51页
   ·RNA 质量第45页
   ·mRNA(messenger RNA,信使RNA)质量第45-46页
   ·cDNA 双链合成第46-48页
   ·cDNA 片段大小筛选第48-49页
   ·cDNA 的检测第49-51页
     ·cDNA 文库库容检测第49-50页
     ·插入片段大小检测第50-51页
 3 讨论第51-54页
第三章 长筒石蒜花瓣EST 序列的测定第54-64页
 1 材料与方法第54-59页
   ·实验试剂及仪器第54-55页
   ·材料第55页
   ·实验方法第55-59页
     ·铺布平板第55页
     ·大规模质粒提取第55-56页
     ·确定EST 序列测定的方案第56-59页
 2 结果与分析第59-62页
   ·大规模质粒DNA 提取第59页
   ·测序条件的优化第59-61页
     ·不同T3 引物用量比较第59-60页
     ·不同PCR 仪的比较及其他注意事项第60-61页
   ·大规模EST序列测定第61-62页
 3 讨论第62-64页
   ·质粒提取第62-63页
     ·菌株活力对质粒提取的影响第62页
     ·质粒DNA 的多带现象第62-63页
   ·关于DNA 测序的几个问题第63-64页
     ·模板用量与引物用量的平衡第63页
     ·测序产物的纯化第63-64页
第四章 长筒石蒜花瓣的基因表达谱分析第64-75页
 1 实验材料与方法第64-65页
   ·分析材料第64页
   ·生物信息学分析第64-65页
     ·序列拼接第64-65页
     ·功能注释及功能分类第65页
 2 结果与分析第65-73页
   ·有效EST 序列的获得第65-67页
   ·EST 序列拼接分析第67-69页
   ·基因表达频率与基因表达丰度分析第69-71页
   ·长筒石蒜花瓣EST序列同源性比较分析及基因表达功能分类第71-73页
 3 讨论第73-75页
   ·花瓣表达基因的丰度特征第73页
   ·关于数据库同源性比较的几个问题第73-75页
     ·BIastN与BlastX 比对结果的差异第73-74页
     ·ESTs 与数据库同源性比较第74-75页
第五章 总结与展望第75-77页
参考文献第77-82页
作者简介第82页

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