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农杆菌介导花生基因转化技术体系的优化研究

摘要第1-11页
Abstract第11-15页
1 引言第15-26页
   ·花生组织培养与植株再生的研究进展第15-20页
     ·器官发生途径第16-18页
       ·由外植体分化为芽丛第16-17页
       ·诱导芽丛成苗第17-18页
       ·组培苗生根长成完整植株第18页
     ·胚状体发生途径第18-20页
       ·由外植体分化成胚状体第18-20页
       ·由胚状体形成植株第20页
   ·农杆菌介导的花生遗传转化的研究进展第20-24页
     ·农杆菌介导的遗传转化的原理第20-21页
     ·影响农杆菌介导的遗传转化转化率因素第21-23页
       ·菌株类型第21-22页
       ·菌液浓度第22页
       ·侵染时间第22页
       ·共培养时间第22-23页
     ·提高农杆菌介导花生遗传转化效率的措施第23-24页
       ·添加Vir 区诱导物第23页
       ·提高细胞膜通透性第23-24页
   ·7γ-维生素E 甲基转移酶基因的作用第24-25页
   ·Bar 基因的作用第25页
   ·本研究的目的意义第25-26页
2 材料与方法第26-34页
   ·试验材料第26页
     ·植物材料第26页
     ·外植体的表面消毒第26页
     ·基本培养基第26页
     ·菌株与质粒第26页
   ·试验设计与方法第26-31页
     ·培养基中激素浓度及配比对芽丛成苗率率的影响试验第26-28页
     ·农杆菌介导花生遗传转化适宜筛选条件的研究第28-29页
       ·Bar 基因筛选剂 PPT 的适宜筛选浓度研究第29页
       ·nptⅡ基因适宜筛选剂及筛选浓度研究第29页
     ·培养基pH 值对农杆菌生长的影响试验第29页
     ·菌液浓度和共培养时间对转化率的影响试验第29-31页
   ·转基因花生苗的分子生物学鉴定第31-34页
     ·含目的基因质粒 DNA 的制备第31页
     ·CTAB 法花生基因组DNA 的提取第31-32页
     ·转基因植株的PCR 检测第32-34页
3 结果与分析第34-48页
   ·培养基中激素浓度及配比对芽丛成苗率的影响第34-37页
     ·BA 和NAA 两种激素浓度及配比对芽丛成苗的影响第34页
     ·不同芽伸长培养基诱导芽丛成苗效果第34-37页
   ·农杆菌介导花生遗传转化适宜筛选条件的研究第37-42页
     ·Bat 基因筛选剂 PPT 对不同筛选材料生长的抑制效果第37-39页
       ·组培阶段对各种外植体生长的影响第37-38页
       ·大田筛选的适宜浓度第38-39页
     ·nptⅡ基因转化花生适宜筛选剂及其浓度的第39-41页
       ·筛选剂Kan 对不同外植体生长的抑制作用第39-40页
       ·筛选剂 Neo 对芽丛的抑制作用第40-41页
     ·-3 筛选剂 G418 对芽丛的抑制作用第41-42页
   ·农杆菌菌株 GV3101 介导花生遗传转化侵染条件的优化第42-45页
     ·培养基pH 值对农杆菌生长的影响第42页
     ·菌液浓度及共培养时间对花生基因转化效率的影响第42-45页
       ·菌液浓度及共培养时间对农杆菌过度繁殖率的影响第42-44页
       ·菌液浓度及共培养时间对转化率的影响第44-45页
   ·转基因植株的分子检测第45-48页
4 讨论第48-53页
   ·影响花生组织培养植株再生的主要因素分析第48-49页
   ·试验2.2.1 结果相悖的原因分析第49页
   ·组织培养过程中花器官发育第49-50页
   ·农杆菌介导花生遗传转化条件分析第50-51页
     ·影响农杆菌介导花生遗传转化效率的因素第50页
     ·协调农杆菌过度繁殖率与基因转化率的矛盾第50-51页
   ·进步研究设想第51-53页
5 结论第53-55页
   ·适宜诱导芽丛成苗的培养基激素配比第53页
   ·标记基因 Bar 和 NptⅡ筛选剂适宜筛选浓度第53-54页
   ·农杆菌介导花生基因转化的优化条件第54页
   ·农杆菌介导花生基因转化的技术流程第54页
   ·Bay 基因连同γ-tmt 基因转入花生栽培品种丰花2 号第54-55页
参考文献第55-63页
附录第63-67页
致谢第67-68页
攻读硕士学位期间发表论文情况第68-69页
图版第69-71页

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