| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-28页 |
| ·动物细胞表达系统简介 | 第11-15页 |
| ·宿主细胞 | 第11-12页 |
| ·载体 | 第12-13页 |
| ·外源基因 | 第13-14页 |
| ·外源基因在哺乳动物细胞中的表达方式 | 第14-15页 |
| ·与外源基因表达相关的非编码DNA序列 | 第15-22页 |
| ·常见的质粒载体上的影响转录翻译的序列 | 第15-17页 |
| ·与真核表达调控相关的染色质的非编码DNA顺式元件 | 第17-22页 |
| ·本研究的设计思路 | 第22-26页 |
| ·宿主细胞的选择 | 第23页 |
| ·质粒表达载体的确定 | 第23-26页 |
| ·抗阻遏子元件的应用 | 第26页 |
| ·报道基因的选择 | 第26页 |
| ·本研究的意义和目的 | 第26-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-37页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·材料 | 第29-33页 |
| ·细胞株及质粒 | 第29页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第29-30页 |
| ·常用试剂及配方 | 第30-33页 |
| ·实验方法技术 | 第33-37页 |
| ·基因工程技术 | 第33-35页 |
| ·细胞培养技术 | 第35-37页 |
| 第三章 重组质粒转染CHO、筛选及外源蛋白表达检测的条件摸索和确定 | 第37-51页 |
| ·CHO细胞转染、筛选的摸索及确定 | 第37-39页 |
| ·重组质粒转染条件的确定 | 第37-38页 |
| ·G418筛选条件的确定 | 第38-39页 |
| ·外源蛋白的表达检测的摸索及确定 | 第39-50页 |
| ·plRESneo3-bFGF质粒载体的构建 | 第39-42页 |
| ·重组bFGF的转染和筛选 | 第42-43页 |
| ·基因组水平的检测 | 第43-44页 |
| ·mRNA水平的检测 | 第44-46页 |
| ·蛋白水平的检测 | 第46-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第四章 用于CHO大规模培养的通用载体的构建和鉴定 | 第51-66页 |
| ·CHO基因组中抗阻遏子元件的分离 | 第51-55页 |
| ·引物设计 | 第51-52页 |
| ·半巢式PCR分离抗阻遏子元件 | 第52-53页 |
| ·分离得到序列的克隆与测序 | 第53-54页 |
| ·分离抗阻遏子元件同源性对比 | 第54-55页 |
| ·plnAR2质粒的构建 | 第55-60页 |
| ·PCR扩增抗阻遏子元件序列 | 第55页 |
| ·真核转录本上游抗阻遏子元件的构建 | 第55-57页 |
| ·真核转录本下游抗阻遏子元件的构建 | 第57-60页 |
| ·报道基因对抗阻遏子元件的检测 | 第60-65页 |
| ·分泌型bFGF—plnAR2-bFGF | 第60-63页 |
| ·plnAR2-EGFP | 第63-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第五章 讨论 | 第66-75页 |
| ·抗阻遏子元件对CHO表达外源蛋白方面的影响 | 第66-68页 |
| ·采用半巢式PCR方法能够有效提高获得抗阻遏子元件的几率 | 第66-67页 |
| ·抗阻遏子元件能够提高外源基因整合的效率，具有抗阻遏的活性 | 第67-68页 |
| ·表达载体的选择和改造 | 第68-70页 |
| ·载体的选择 | 第68-69页 |
| ·载体含有内部核糖体进入位点对外源蛋白表达筛选有一定的促进作用 | 第69页 |
| ·在双顺反子载体中插入抗阻遏子元件 | 第69-70页 |
| ·外源蛋白的表达特性及检测方法的选择和确立 | 第70-72页 |
| ·分泌型bFGF的特性分析 | 第70-71页 |
| ·分泌型bFGF表达的免疫学检测未达预期结果 | 第71-72页 |
| ·其他 | 第72-75页 |
| ·脂质体转染 | 第72-74页 |
| ·针对不同的系统选择适宜的抗性基因作为标记 | 第74-75页 |
| 第六章 总结与展望 | 第75-77页 |
| ·总结 | 第75页 |
| ·展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 附录 | 第84-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
