| 目录 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| 英文摘要 | 第11-16页 |
| 略语表 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述及研究目标 | 第18-42页 |
| 1 关于草鱼出血病病毒 | 第18-22页 |
| ·草鱼出血病病毒概况 | 第18-19页 |
| ·草鱼出血病病毒引起的组织、细胞病变 | 第19-20页 |
| ·草鱼出血病病毒的传统防治方法 | 第20页 |
| ·关于实验材料及方法的选择 | 第20-22页 |
| 2 关于 RNA 干扰(RNAi) | 第22-39页 |
| ·RNAi 现象的发现 | 第22-25页 |
| ·RNAi 的作用机制模型 | 第25-28页 |
| ·RNAi 在哺乳类培养细胞中的应用 | 第28-29页 |
| ·RNAi 的抗病毒研究 | 第29-30页 |
| ·RNAi 在小鼠体内的作用 | 第30-31页 |
| ·RNAi 在鱼类中的研究 | 第31-32页 |
| ·RNAi 应用小结 | 第32-34页 |
| ·siRNA 的设计 | 第34-35页 |
| ·siRNA 表达载体 | 第35-37页 |
| ·siRNA 的转移 | 第37页 |
| ·RNAi 的局限性 | 第37-38页 |
| ·RNAi 总结 | 第38-39页 |
| 3 研究方案及预期目标 | 第39-42页 |
| 第二章 草鱼H1基因及启动子克隆 | 第42-52页 |
| 1 材料和方法 | 第43-47页 |
| ·实验鱼和取材 | 第43页 |
| ·高质量基因组 DNA 制备 | 第43页 |
| ·PCR 扩增草鱼 H1 基因 | 第43-44页 |
| ·TAIL-PCR 方法克隆 H1 启动子 | 第44-45页 |
| ·PCR 产物回收 | 第45-46页 |
| ·PCR 产物的 T 载体克隆与测序 | 第46-47页 |
| 2 结果 | 第47-50页 |
| ·草鱼 H1 基因克隆结果 | 第47-48页 |
| ·草鱼 H1 基因启动子克隆结果 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 草鱼H1启动子活性分析 | 第52-68页 |
| 1 材料和方法 | 第52-61页 |
| ·RNAi 载体的构建 | 第52-55页 |
| ·基因转移 | 第55页 |
| ·观察 GFP 在斑马鱼胚胎中的表达 | 第55页 |
| ·胚胎总 RNA 制备 | 第55-56页 |
| ·胚胎总蛋白提取 | 第56-57页 |
| ·实时荧光定量 PCR 分析 | 第57-58页 |
| ·Western blot 分析 | 第58-61页 |
| 2 结果 | 第61-66页 |
| ·RNAi 载体的酶切及测序分析 | 第61-62页 |
| ·GFP 在斑马鱼胚胎中的表达 | 第62-64页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测 GFP mRNA 表达水平 | 第64-66页 |
| ·Western blot 结果分析 | 第66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 不同形式不同浓度的小 RNA 对转录后基因沉默的影响 | 第68-76页 |
| 1 实验材料和方法 | 第68-70页 |
| ·载体的准备 | 第68-69页 |
| ·基因转移 | 第69页 |
| ·观察 GFP 在斑马鱼胚胎中的表达 | 第69页 |
| ·胚胎总 RNA 提取 | 第69页 |
| ·胚胎总蛋白的提取 | 第69-70页 |
| ·实时荧光定量 PCR 分析 | 第70页 |
| ·Western Blot 分析 | 第70页 |
| 2 结果 | 第70-74页 |
| ·GFP 在斑马鱼胚胎中的表达 | 第70-72页 |
| ·实时荧光定量 PCR 结果 | 第72-73页 |
| ·Western blot 分析结果 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 RNAi在草鱼细胞水平上对病毒复制的影响 | 第76-82页 |
| 1 实验材料和方法 | 第76-78页 |
| ·病毒靶基因的选择 | 第76页 |
| ·抗病毒 RNAi 载体 pH1siGCRV(x)-CMVeGFP 的构建 | 第76-77页 |
| ·GCRV991 毒株滴度测定 | 第77页 |
| ·转染 | 第77-78页 |
| ·细胞攻毒 | 第78页 |
| 2 结果 | 第78-81页 |
| ·GCRV991 毒株滴度测定结果 | 第78页 |
| ·转染细胞空斑结果 | 第78-81页 |
| 3 讨论 | 第81-82页 |
| 第六章 RNAi在稀有鮈鲫体内的抗病活性研究 | 第82-121页 |
| 1 材料和方法 | 第82-83页 |
| ·显微注射以及阳性鱼筛选 | 第82页 |
| ·GCRV 病毒毒株 991 最佳攻毒剂量的确定 | 第82页 |
| ·转基因稀有鮈鲫攻毒 | 第82-83页 |
| ·RT-PCR 检测病毒颗粒在不同组织中的分布 | 第83页 |
| ·实时荧光定量 PCR 分析不同基因的表达差异 | 第83页 |
| 2 结果 | 第83-119页 |
| ·毒株991最佳攻毒剂量的确定 | 第83-85页 |
| ·转基因稀有鮈鲫攻毒结果 | 第85-86页 |
| ·RT-PCR 检测病毒颗粒在不同组织中的分布结果 | 第86-88页 |
| ·荧光定量 PCR 分析不同基因的表达差异结果 | 第88-119页 |
| 3 讨论 | 第119-121页 |
| 第七章 总结 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-136页 |
| 附录一 论文中所用的引物以及寡核苷酸序列 | 第136-137页 |
| 附录二 主要试剂溶液及仪器 | 第137-140页 |
| 附录三 个人简历 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
