| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 英文缩略语表 | 第12-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-18页 |
| ·erbB-2基因及P185蛋白 | 第13-15页 |
| ·基因工程抗体和抗体库技术的研究进展 | 第15-16页 |
| ·P185~(erbB2)蛋白为靶标的治疗性抗体的研究进展 | 第16-18页 |
| 第2章 P185~(erbB-2)蛋白胞外区基因的克隆及其在大肠杆菌中的可溶性表达 | 第18-34页 |
| ·材料 | 第18-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第18页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第18-19页 |
| ·主要工具酶及试剂盒 | 第19页 |
| ·主要生化试剂 | 第19页 |
| ·主要试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·计算机软件包 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-27页 |
| ·细胞培养 | 第22页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第22页 |
| ·RT-PCR扩增cDNA第一条链 | 第22页 |
| ·PCR扩增目的DNA片段 | 第22-23页 |
| ·DNA片段的回收 | 第23页 |
| ·DNA的定量 | 第23页 |
| ·限制性内切酶消化DNA分子 | 第23页 |
| ·DNA片段的连接 | 第23-24页 |
| ·转化 | 第24页 |
| ·SDS—PAGE | 第24页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第24页 |
| ·透析袋的处理 | 第24-25页 |
| ·带His-tag目的蛋白的纯化 | 第25页 |
| ·Western blot检测 | 第25-26页 |
| ·目的蛋白的浓度测定 | 第26-27页 |
| ·结果 | 第27-32页 |
| ·G3N1基因与ERB基因的分离 | 第27页 |
| ·G3N1、ERB基因的分离及重组表达载体的构建 | 第27-29页 |
| ·重组载体pET-GN的构建 | 第27-28页 |
| ·重组载体pET-GE的构建 | 第28-29页 |
| ·GERB蛋白的可溶性表达与western blot分析 | 第29-30页 |
| ·GERB蛋白的纯化及定量 | 第30-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| ·表达区域的选择 | 第32-33页 |
| ·影响外源蛋白表达的因素 | 第33页 |
| ·外源蛋白表达的检测 | 第33-34页 |
| 第3章 应用噬菌体展示技术筛选抗P185~(erbB-2)的单链抗体 | 第34-48页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·菌种与质粒 | 第34页 |
| ·抗体库 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要设备及耗材 | 第34页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第34-36页 |
| ·方法 | 第36-40页 |
| ·辅助噬菌体的制备 | 第36页 |
| ·重组噬菌体人ScFv抗体库的扩增 | 第36-37页 |
| ·噬菌体抗体库和辅助噬菌体滴度的测定 | 第37页 |
| ·单链噬菌体抗体库的富集筛选 | 第37-38页 |
| ·噬菌体结合子的鉴定 | 第38-39页 |
| ·阳性噬菌体结合子ScFv基因的克隆与序列分析 | 第39页 |
| ·ScFv克隆入含E-tag的表达载体 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-45页 |
| ·单链噬菌体抗体库的富集筛选 | 第40页 |
| ·噬菌体结合子的鉴定 | 第40-43页 |
| ·测序结果 | 第43页 |
| ·ScFv克隆入含E-tag的表达载体 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| ·单链抗体的特性 | 第45页 |
| ·噬菌体抗体库技术 | 第45-46页 |
| ·噬菌体抗体库的筛选 | 第46页 |
| ·抗P185~(erbB-2)蛋白的筛选 | 第46-48页 |
| 第4章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 作者研究生期间发表的论文 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
