| 中文摘要 | 第1-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 英文缩略表 | 第18-20页 |
| 1. 引言 | 第20-49页 |
| ·植物启动子的基本结构 | 第20-22页 |
| ·转录起始位点的特点 | 第20页 |
| ·TATA-box | 第20-21页 |
| ·CAAT-box | 第21页 |
| ·GC-box | 第21页 |
| ·特殊的上游顺式作用元件 | 第21-22页 |
| ·组成型启动子 | 第22-26页 |
| ·CaMV35S启动子 | 第23-24页 |
| ·CsVMV 启动子 | 第24页 |
| ·Act1启动子 | 第24页 |
| ·Ubiquitin 启动子 | 第24-25页 |
| ·NOS、OCS 启动子 | 第25-26页 |
| ·诱导型启动子 | 第26-36页 |
| ·光诱导启动子 | 第26-28页 |
| ·伤诱导启动子 | 第28-29页 |
| ·植物激素诱导启动子 | 第29-34页 |
| ·生长素诱导启动子 | 第29-30页 |
| ·赤霉素诱导启动子 | 第30-31页 |
| ·脱落酸诱导启动子 | 第31-32页 |
| ·乙烯诱导启动子 | 第32页 |
| ·水杨酸诱导启动子 | 第32-33页 |
| ·茉莉酮酸诱导启动子 | 第33-34页 |
| ·温度诱导启动子 | 第34-36页 |
| ·高温诱导启动子 | 第34-35页 |
| ·低温诱导启动子 | 第35-36页 |
| ·组织特异性启动子 | 第36-46页 |
| ·根特异启动子 | 第36-37页 |
| ·韧皮部特异表达启动子 | 第37-39页 |
| ·植物病毒来源的韧皮部特异表达启动子 | 第38页 |
| ·植物来源的韧皮部特异表达启动子 | 第38-39页 |
| ·植物病原菌来源的韧皮部特异表达启动子 | 第39页 |
| ·维管束特异表达启动子 | 第39-40页 |
| ·叶片表达启动子 | 第40-41页 |
| ·光诱导型叶片特异表达启动子 | 第40-41页 |
| ·组成型叶片特异表达启动子 | 第41页 |
| ·花特异表达启动子 | 第41-42页 |
| ·花药特异表达启动子 | 第41-42页 |
| ·花粉特异表达启动子 | 第42页 |
| ·果实特异表达启动子 | 第42-43页 |
| ·种子特异表达启动子 | 第43-46页 |
| ·单子叶植物种子特异表达启动子 | 第44-45页 |
| ·双子叶植物种子特异表达启动子 | 第45-46页 |
| ·植物碱性亮氨酸拉链蛋白的结构和分类 | 第46-47页 |
| ·植物bZIP 蛋白的结构 | 第46-47页 |
| ·植物bZIP 蛋白的分类 | 第47页 |
| ·植物bZIP 蛋白的功能 | 第47页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第47-49页 |
| 2 材料与方法 | 第49-130页 |
| ·实验材料 | 第49-51页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·菌株与质粒 | 第49页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第49页 |
| ·实验用的引物和寡核苷酸 | 第49-51页 |
| ·实验方法 | 第51-76页 |
| ·植物基因组总 DNA | 第51-52页 |
| ·植物基因组 DNA 的纯化 | 第52页 |
| ·植物总 RNA 的提取 | 第52-53页 |
| ·异硫酸氰胍-酸性酚-LiCl 法 | 第52-53页 |
| ·用 RNeasy Plant Mini Kit 提取总 RNA | 第53页 |
| ·RNA 纯化 | 第53页 |
| ·PNZIP 启动子的分离 | 第53-54页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第54页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态的制备 | 第54页 |
| ·大肠杆菌细胞的转化 | 第54-55页 |
| ·克隆载体的酶切鉴定 | 第55页 |
| ·序列的测定 | 第55页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第55-56页 |
| ·煮沸法 | 第55-56页 |
| ·大量法提质粒 | 第56页 |
| ·PNZIP 基因转录起始位点的鉴定 | 第56-57页 |
| ·亚克隆的测序 | 第57-58页 |
| ·凝胶电泳中 DNA 片段的回收 | 第58页 |
| ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备 | 第58页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第58-59页 |
| ·农杆菌介导的烟草的转化 | 第59页 |
| ·GUS 活性的组织化学分析 | 第59-60页 |
| ·GUS 基因表达的定量分析 | 第60-61页 |
| ·Northern 杂交 | 第61-63页 |
| ·RNA 提取及电泳 | 第61-62页 |
| ·转膜及烘膜 | 第62页 |
| ·探针的合成 | 第62页 |
| ·预杂交及杂交 | 第62-63页 |
| ·Southern 杂交 | 第63页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第63页 |
| ·转膜 | 第63页 |
| ·预杂交及杂交 | 第63页 |
| ·植物核蛋白的提取 | 第63-64页 |
| ·EMSA 探针的标记 | 第64-65页 |
| ·EMSA 探针的纯化 | 第65页 |
| ·制备聚丙烯酰胺凝胶 | 第65页 |
| ·DNA 探针与蛋白质的结合 | 第65-66页 |
| ·电泳、干胶及放射自显影 | 第66页 |
| ·小量 LiAc/PEG 法制备酵母感受态细胞及其质粒转化 | 第66-67页 |
| ·报告载体的3-AT 浓度的选择 | 第67页 |
| ·酵母质粒提取 | 第67页 |
| ·烟草mRNA 的分离 | 第67-68页 |
| ·烟草 cDNA 第一链的合成 | 第68页 |
| ·文库蛋白双链 DNA 的合成 | 第68-69页 |
| ·双链文库 DNA 的纯化 | 第69页 |
| ·报告载体和cDNA 文库质粒向酵母的共转化 | 第69-70页 |
| ·阳性克隆的互作分析 | 第70-71页 |
| ·文库插入片段的分离和电泳鉴定 | 第71页 |
| ·阳性克隆全长序列的获得 | 第71-72页 |
| ·烟草cDNA 第一条链的合成 | 第71页 |
| ·阳性克隆 5′ 端序列的获得 | 第71-72页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第72页 |
| ·原核表达烟草 NtbZIP 蛋白 | 第72-74页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第72页 |
| ·大肠杆菌 BL21 原核表达的诱导 | 第72-73页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第73-74页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第74页 |
| ·启动子活性的瞬时表达分析 | 第74-75页 |
| ·烟草叶片的处理 | 第74页 |
| ·轰击时微弹的准备 | 第74页 |
| ·基因枪的轰击 | 第74-75页 |
| ·农杆菌介导的目的蛋白的细胞定位 | 第75-76页 |
| ·洋葱表皮细胞的浸染和转化 | 第75页 |
| ·目的蛋白的细胞定位观察 | 第75-76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-120页 |
| ·PNZIP 启动子是一个光合组织特异表达强启动子 | 第76-85页 |
| ·PNZIP 启动子的分离 | 第76-77页 |
| ·PNZIP 启动子转录起始位点的确定 | 第77-78页 |
| ·PNZIP 全长启动子与 GUS 基因融合 | 第78-79页 |
| ·番茄 Rbcs-3A 启动子与 GUS 基因融合 | 第79-80页 |
| ·含有 PNZIP 全长启动子、Rbcs-3A 启动子转基因烟草的获得 | 第80-81页 |
| ·GUS 活性与转基因拷贝数的关系 | 第81-82页 |
| ·PNZIP 启动子是一个光合组织特异表达启动子 | 第82-85页 |
| ·PNZIP 启动子是一个受昼夜节律调控的启动子 | 第85-86页 |
| ·PNZIP 启动子的调控分析 | 第86-102页 |
| ·PNZIP 启动子的结构分析 | 第86-88页 |
| ·PNZIP 启动子不同缺失突变体的获得 | 第88-92页 |
| ·PNZIP 启动子 5′ 端缺失突变体的获得 | 第89-90页 |
| ·PNZIP 启动子 3′ 端缺失突变体的获得 | 第90-91页 |
| ·PNZIP 启动子 3′ 端缺失片段与 90-35S 启动子的嵌合 | 第91-92页 |
| ·含有不同长度 PNZIP 启动子转基因烟草的获得 | 第92-93页 |
| ·各类转基因烟草 GUS 活性的检测 | 第93-96页 |
| ·PNZIP 启动子的外部缺失突变体驱动 GUS 基因表达活性的检测 | 第93-94页 |
| ·PNZIP 启动子的内部缺失突变体驱动 GUS 基因表达活性的检测 | 第94-95页 |
| ·PNZIP 启动子的内部缺失片段与 90-35S 启动子嵌合体的 GUS 活性的检测 | 第95-96页 |
| ·GAAATA 元件是一个正调控元件 | 第96-99页 |
| ·GAAATA 元件可以和烟草核蛋白特异性结合 | 第96-97页 |
| ·GAAATA 元件中参与和烟草核蛋白结合的关键核苷酸 | 第97-98页 |
| ·GAAATA 元件是一个正调控元件 | 第98-99页 |
| ·GATACT 元件、G-box 元件相互作用决定了启动子的叶片特异表达 | 第99-101页 |
| ·ODN 技术对 PNZIP 启动子-379 到-100 区段的功能鉴定 | 第101-102页 |
| ·与 PNZIP 启动子-379 到-100 区段结合转录因子的克隆与功能分析 | 第102-120页 |
| ·与 PNZIP 启动子-379 到-100 区段结合转录因子的克隆 | 第102-109页 |
| ·酵母报告载体的构建 | 第102-103页 |
| ·酵母报告载体向酵母 Y187 的转化以及3-AT 浓度的选择 | 第103-104页 |
| ·烟草cDNA 文库的构建 | 第104-105页 |
| ·报告载体和cDNA 文库质粒向酵母的转化 | 第105页 |
| ·阳性克隆的初步筛选 | 第105-106页 |
| ·部分阳性克隆文库载体与报告载体作用强弱的鉴定 | 第106-107页 |
| ·部分阳性克隆的复筛 | 第107页 |
| ·阳性克隆的测序和分析 | 第107-109页 |
| ·NtbZIP 全长序列的获得 | 第109页 |
| ·NtbZIP 基因序列的分析 | 第109-113页 |
| ·NtbZIP 蛋白 DNA 结合特性的分析 | 第113-116页 |
| ·NtbZIP 基因的原核表达 | 第113-114页 |
| ·NtbZIP 蛋白的纯化 | 第114-115页 |
| ·NtbZIP 重组蛋白与 PNZIP 启动子-379 到-100 区段结合 | 第115-116页 |
| ·NtbZIP 蛋白可以增强 PNZIP 启动子-379 到-100 区段的活性 | 第116-117页 |
| ·NtbZIP 基因的亚细胞定位 | 第117-118页 |
| ·NtbZIP 基因的 Southern 杂交分析 | 第118页 |
| ·NtbZIP 基因的表达分析 | 第118-120页 |
| 4 讨论 | 第120-128页 |
| ·PNZIP 启动子是一个特殊的组织特异启动子 | 第120-122页 |
| ·PNZIP 启动子是一个光合组织特异启动子 | 第120-121页 |
| ·PNZIP 启动子受昼夜节律调控 | 第121-122页 |
| ·PNZIP 启动子可能的调控方式 | 第122-125页 |
| ·G-box 与 GATACT 相互作用共同决定启动子的叶片特异表达 | 第122-123页 |
| ·GAAATA 元件是一个正调控元件 | 第123-124页 |
| ·Box-II 是一个正调控元件 | 第124页 |
| ·A/T 富集基序是一个正调控元件 | 第124-125页 |
| ·酵母单杂交试验中的假阳性和假阴性 | 第125页 |
| ·NtbZIP 基因编码一种含有亮氨酸拉链的蛋白质 | 第125-126页 |
| ·融合蛋白的原核表达和培养条件对表达产量的提高 | 第126-128页 |
| 5. 结论 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-150页 |
| 附录1 | 第150-154页 |
| 附录2 | 第154-155页 |
| 致谢 | 第155页 |
