| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-38页 |
| 1 植物转化技术的研究进展及其在禾本科植物中的应用 | 第10-22页 |
| ·农杆菌介导法 | 第10-15页 |
| ·其它转化方法 | 第15-22页 |
| ·PEG介导法 | 第15-16页 |
| ·脂质体介导法 | 第16页 |
| ·电激法(electroporation transformation) | 第16页 |
| ·基因枪轰击法 | 第16-17页 |
| ·微注射法(microinjection) | 第17页 |
| ·超声波介导法 | 第17-18页 |
| ·脉冲电泳法 | 第18页 |
| ·激光微束法 | 第18-19页 |
| ·碳硅纤维导入法 | 第19页 |
| ·离子束介导法 | 第19-20页 |
| ·病毒介导法 | 第20页 |
| ·染色体介导的直接转化 | 第20页 |
| ·花粉管通道法 | 第20-21页 |
| ·花粉介导法 | 第21页 |
| ·种胚浸泡法 | 第21-22页 |
| 2 生物安全研究进展 | 第22-33页 |
| ·选用安全的标记基因 | 第23-27页 |
| ·糖类代谢酶标记基因利用 | 第23-25页 |
| ·核糖醇操纵子 | 第23页 |
| ·6-磷酸甘露糖异构酶基因 | 第23-24页 |
| ·木糖异构酶基因 | 第24-25页 |
| ·绿色荧光蛋白基因(GFP) | 第25页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶基因 | 第25-26页 |
| ·谷氨酸-1-半醛转氨酶基因 | 第26-27页 |
| ·无选择标记转基因植株的获得 | 第27-32页 |
| ·共转化法 | 第28页 |
| ·双T-DNA边界序列以及双右边界T-DNA转化法 | 第28-29页 |
| ·位点特异性重组转化系统 | 第29-30页 |
| ·转座子系统 | 第30-31页 |
| ·依靠同源重组 | 第31页 |
| ·多次自动转化载体系统 | 第31-32页 |
| ·叶绿体转化体系 | 第32-33页 |
| 3 水稻抗白叶枯病基因工程育种 | 第33-38页 |
| ·开展水稻抗白叶枯病基因工程育种的意义 | 第33-37页 |
| ·利用Xa21基因进行抗白叶枯病基因工程育种技术路线 | 第37-38页 |
| 第二章 材料与方法 | 第38-49页 |
| 1 实验材料 | 第38页 |
| ·供试水稻品种 | 第38页 |
| ·菌株及质粒 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-42页 |
| ·适合电激转化感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·电激转化(GIBCO-BRL CELL PORRATOR) | 第39页 |
| ·菌株的保存 | 第39-40页 |
| ·外植体的培养及农杆菌的转化 | 第40-42页 |
| ·培养基 | 第40-41页 |
| ·农杆菌转化 | 第41-42页 |
| ·幼胚预培养 | 第41页 |
| ·胚性愈伤组织的诱导: | 第41页 |
| ·农杆菌处理 | 第41页 |
| ·幼胚转化 | 第41-42页 |
| ·愈伤组织转化:同幼胚转化。 | 第42页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选 | 第42页 |
| ·抗性愈伤组织的预分化 | 第42页 |
| ·抗性愈伤组织的分化 | 第42页 |
| ·生根和移苗 | 第42页 |
| 3 转基因水稻的检测 | 第42-47页 |
| ·转基因的PCR检测 | 第42-44页 |
| ·水稻总DNA的微量提取(SDS法) | 第42-43页 |
| ·PCR引物及反应体系 | 第43页 |
| ·电泳检测扩增结果 | 第43-44页 |
| ·Southern Blot检测 | 第44-47页 |
| ·转基因水稻总DNA的大量提取(SDS法) | 第44页 |
| ·植物总DNA酶切、电泳、转膜和杂交 | 第44-47页 |
| ·水稻总DNA的酶切 | 第44-45页 |
| ·电泳与转膜 | 第45页 |
| ·探针的制备 | 第45-46页 |
| ·预杂交 | 第46页 |
| ·探针标记(采用Random Hexamer标记法)与杂交 | 第46页 |
| ·洗膜 | 第46页 |
| ·放射自显影 | 第46-47页 |
| ·抗性检测 | 第47页 |
| 4 获得无标记基因转基因植株技术路线(见图2.2) | 第47-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-70页 |
| 1 水稻稻转化、再生体系的优化 | 第49-57页 |
| ·不同基因型各发育阶段对潮霉素敏感性试验 | 第49-52页 |
| ·不同基因型继代过程中对潮霉素敏感性试验 | 第49-50页 |
| ·不同基因型在分化时中对潮霉素敏感性试验 | 第50-51页 |
| ·不同基因型水稻在幼苗对潮霉素敏感性试验 | 第51-52页 |
| ·培养基对愈伤组织诱导，继代，筛选，分化的影响 | 第52-54页 |
| ·培养基对愈伤组织诱导，继代的影响 | 第52-53页 |
| ·培养基对愈伤组织筛选的影响 | 第53页 |
| ·分化培养基对候选抗性愈伤分化率的影响 | 第53-54页 |
| ·菌液浓度对转化效率的影响 | 第54-55页 |
| ·优化的籼稻农杆菌转化体系的建立 | 第55-57页 |
| 2 转基因植株的分析: | 第57-70页 |
| ·转基因植株的获得 | 第57-59页 |
| ·T_0代转基因植株的分析 | 第59-62页 |
| ·T_1代转基因植株的分析 | 第62-65页 |
| ·T_2代转基因植株的分析 | 第65-67页 |
| ·T_3代转基因植株的分析 | 第67-68页 |
| ·Southern blot检测 | 第68-70页 |
| 第四章 结论 | 第70-71页 |
| 第五章 讨论 | 第71-77页 |
| 1 水稻愈伤组织诱导和再生体系的优化 | 第71-72页 |
| 2 农杆菌介导水稻愈伤组织转化体系的优化 | 第72-74页 |
| 3 基因沉默 | 第74-75页 |
| 4 利用双右边界双元载体系统与去除标记基因的其他方法的比较 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
