| 目录 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 tRNATrp的识别依赖于色氨酰tRNA合成酶的两个重要肽段 | 第8-32页 |
| 1 引言 | 第8-10页 |
| 2 材料和方法 | 第10-14页 |
| ·序列同源性分析 | 第10-11页 |
| ·枯草杆菌TrpRS缺失突变体的构建 | 第11页 |
| ·色氨酰tRNA合成酶的表达与纯化 | 第11-12页 |
| ·tRNATrp体外转录及纯化 | 第12-13页 |
| ·磷交换反应动力学分析 | 第13页 |
| ·tRNA氨酰化反应的动力学测定 | 第13-14页 |
| ·色氨酰tRNA合成酶识别tDNATrp小螺旋的凝胶阻滞实验 | 第14页 |
| 3 结果 | 第14-23页 |
| ·不同种属来源的色氨酰tRNA合成酶具有较高的保守性 | 第15-16页 |
| ·枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶及其突变体的纯化和表达性质 | 第16-17页 |
| ·磷交换反应证明缺失掉的肽段对氨基酸的活化影响不大 | 第17-19页 |
| ·TrpRS突变体蛋白质对tRNATrp的识别与催化 | 第19-21页 |
| ·色氨酰tRNA合成酶与tDNATrp小螺旋结合实验 | 第21-23页 |
| 4 讨论 | 第23-27页 |
| 参考文献 | 第27-32页 |
| 第二章 K149和E153参与枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶的种属特异性识别 | 第32-58页 |
| 1 引言 | 第32-35页 |
| 2 材料和方法 | 第35-38页 |
| ·菌株、质粒和生化试剂 | 第35页 |
| ·序列同源性分析 | 第35-36页 |
| ·枯草杆菌TrpRS突变体的构建和纯化 | 第36页 |
| ·tRNATrp体外转录及纯化 | 第36-37页 |
| ·氨基酸活化反应的动力学实验 | 第37页 |
| ·tRNATrp氨酰化反应的动力学分析 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-44页 |
| ·K149/E153及其对应残基的侧链基团电性呈进化多样性 | 第38-40页 |
| ·色氨酸活化反应中TrpRS突变体对反应的影响 | 第40-42页 |
| ·K149和E153的改变使TrpRS对枯草杆菌tRNATrp的氨酰化活力降低 | 第42页 |
| ·枯草杆菌TrpRS突变体交叉催化人源tRNATrp的氨酰化活力 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 第三章 保守残基的种属差异确保了Ic类合成酶的种属特异性 | 第58-92页 |
| 1 引言 | 第58-62页 |
| 2 材料和方法 | 第62-64页 |
| ·菌株、质粒和生化试剂 | 第62页 |
| ·序列同源性分析 | 第62-63页 |
| ·构建和纯化枯草杆菌TrpRS和人TrpRS突变体 | 第63页 |
| ·tRNATrp体外转录及纯化 | 第63-64页 |
| ·tRNATrp氨酰化反应的动力学分析 | 第64页 |
| ·Ic类氨酰tRNA合成酶tRNA结合位点的预测 | 第64页 |
| 3 结果 | 第64-80页 |
| ·Ic类氨酰tRNA合成酶tRNA结合位点的保守残基表现出明显的种属差 | 第64-66页 |
| ·tRNATrp中识别元件与TrpRS的保守残基表现出共进化特征 | 第66-69页 |
| ·TrpRS保守残基侧链基团上的电性存在种属差异性与tRNATrp识别元件的种属差异相对应 | 第69-71页 |
| ·改变保守残基的电性会削弱TrpRS对相应tRNATrp的催化活力 | 第71-76页 |
| ·保守残基侧链基团电荷变化可能改变TrpRS的种属特异性 | 第76-78页 |
| ·催化tRNATrp突变体的动力学数据表明保守残基主要与tRNATrp识别元件相作用 | 第78-79页 |
| ·未知结构的Ic类氨酰tRNA合成酶的tRNA结合位点预测 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-85页 |
| 参考文献 | 第85-92页 |
| 第四章 重组人酪氨酰tRNA合成酶的表达、纯化及性质测定 | 第92-106页 |
| 1 引言 | 第92-94页 |
| 2 材料和方法 | 第94-97页 |
| ·菌株、质粒、细胞和化学试剂 | 第94页 |
| ·RT-PCR和质粒构建 | 第94-95页 |
| ·人酪氨酰tRNA合成酶的异源表达 | 第95页 |
| ·C末端含组氨酸残基的重组人TyrRS蛋白质的纯化 | 第95-96页 |
| ·人tRNATyr的体外转录和纯化 | 第96页 |
| ·氨酰化反应的动力学分析 | 第96-97页 |
| 3 结果 | 第97-100页 |
| ·pET24a(+)-TyrRS质粒的构建 | 第97页 |
| ·重组人TyrRS的表达和纯化 | 第97-98页 |
| ·人TyrRS-His6的氨酰化反应动力学参数 | 第98-100页 |
| 4 讨论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-106页 |
| 发表文章目录 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
