| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-20页 |
| ·极端微生物的定义 | 第9页 |
| ·极端微生物的主要类型 | 第9-10页 |
| ·嗜盐菌研究现状 | 第10-11页 |
| ·嗜盐菌概述 | 第10页 |
| ·极端嗜盐古菌 | 第10页 |
| ·嗜盐机制 | 第10-11页 |
| ·嗜盐菌的应用 | 第11页 |
| ·Na~+输出系统类型的研究 | 第11-13页 |
| ·初级钠泵的作用机制 | 第11-12页 |
| ·次级钠泵的作用机制 | 第12-13页 |
| ·微生物中的Na~+/H~+逆向转运蛋白的研究进展 | 第13-18页 |
| ·大肠杆菌中的Na~+/H~+泵 | 第13-15页 |
| ·霍乱弧菌中的Na~+/H~+泵 | 第15-16页 |
| ·副溶血弧菌中的Na~+/H~+泵 | 第16页 |
| ·幽门螺旋杆菌的Na~+/H~+泵 | 第16-17页 |
| ·枯草芽孢杆菌中的Na~+/H~+泵 | 第17页 |
| ·解藻阮酸弧菌中的Na~+/H~+泵 | 第17页 |
| ·拟坚强芽孢杆菌中的Na~+/H~+泵 | 第17-18页 |
| ·其他细菌中的Na~+/H~+泵 | 第18页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白应用前景 | 第18页 |
| ·研究目的与意义 | 第18-19页 |
| ·主要研究的内容 | 第19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 2 Na~+/H~+逆向转运蛋白基因SmrL的定点突变及突变基因的功能特性研究 | 第20-39页 |
| ·前言 | 第20页 |
| ·材料和方法 | 第20-27页 |
| ·材料 | 第20-23页 |
| ·本研究所用的菌株、质粒和引物 | 第20-21页 |
| ·突变引物 | 第21-22页 |
| ·定点突变试剂盒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·酶、生化试剂及试剂盒 | 第22页 |
| ·制备反转膜所需试剂 | 第22-23页 |
| ·测定Na~+(Li~+)/H~+逆向转运蛋白活性用试剂 | 第23页 |
| ·测定蛋白质浓度用试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-27页 |
| ·突变链的合成 | 第23-24页 |
| ·用DpnI消化PCR产物 | 第24页 |
| ·突变质粒转化XL1-Blue超级感受态细胞 | 第24页 |
| ·突变验证 | 第24页 |
| ·采用试剂盒提取突变质粒 | 第24-25页 |
| ·E.coli KNabc电转化感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·电激转化 | 第25-26页 |
| ·携带突变质粒的KNabc菌株的耐盐性实验 | 第26页 |
| ·携带突变质粒的KNabc菌株的耐碱性实验 | 第26页 |
| ·反转膜的制备及逆向转运蛋白活性的测定 | 第26页 |
| ·Na~+(Li~+)/H~+逆向转运蛋白活性的测定 | 第26-27页 |
| ·用于蛋白质浓度测定的标准曲线制作 | 第27页 |
| ·反转膜中蛋白质浓度的测定 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-37页 |
| ·smrl基因的定点突变 | 第27-28页 |
| ·突变质粒的提取及转化 | 第28-29页 |
| ·突变体的耐盐性测试 | 第29-30页 |
| ·突变体的耐碱性测试 | 第30-31页 |
| ·突变体的Na~+(Li~+)/H~+逆向转运蛋白活性 | 第31-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 3 Na~+/H~+逆向转运蛋白基因mhad1和mhar的亚克隆及功能分析 | 第39-54页 |
| ·前言 | 第39页 |
| ·材料与方法 | 第39-44页 |
| ·材料 | 第39-41页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·电泳相关缓冲液的配制 | 第40页 |
| ·碱法提取质粒所需试剂 | 第40-41页 |
| ·酶、生化试剂及试剂盒 | 第41页 |
| ·制备反转膜所需试剂 | 第41页 |
| ·测定Na~+(Li~+)/H~+逆向转运蛋白活性用试剂 | 第41页 |
| ·测定蛋白质浓度用试剂 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-44页 |
| ·质粒提取(碱裂解法) | 第41-42页 |
| ·亚克隆nhadl和nhar基因 | 第42页 |
| ·电泳及目的DNA片段的回收 | 第42-43页 |
| ·载体的自我连接 | 第43页 |
| ·重组质粒的电激转化 | 第43-44页 |
| ·Na~+和Li~+耐受性实验 | 第44页 |
| ·翻转膜的制备 | 第44页 |
| ·Na~+(Li~+)/H~+逆向转运蛋白活性的测定 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-52页 |
| ·酶切后电泳图分析 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的构建及转化 | 第45-47页 |
| ·E.coli KNabc/pUCnhad1的耐Li~+和耐Na~+实验 | 第47-48页 |
| ·E.coli KNabc/pUCnhad1的Na~+(Li~+)/H~+逆向转运蛋白活性 | 第48-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 缩略词一览表 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 项目资助与论文发表情况 | 第65页 |
