| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 第一章 FMRP相互作用蛋白的研究 | 第10-70页 |
| 1 前言 | 第10-16页 |
| ·研究背景 | 第10-15页 |
| ·研究目的 | 第15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-34页 |
| ·实验材料 | 第16-21页 |
| ·常规实验方法 | 第21页 |
| ·诱饵蛋白重组质粒pGBT9／FMRP iso1.1和FMR1各种异构体的构建 | 第21页 |
| ·五月龄人胚海马酵母双杂交cDNA文库鉴定 | 第21页 |
| ·酵母菌株的保存与表现型验证 | 第21-22页 |
| ·酵母感受态细胞的质粒共转化 | 第22页 |
| ·文库的筛选 | 第22-24页 |
| ·β半乳糖苷酶活性的定性检测 | 第24页 |
| ·酵母质粒的提取与转化 | 第24-26页 |
| ·PCR方法扩增AD文库质粒以及从大肠杆菌HB101里的回收 | 第26页 |
| ·假阳性相互作用的排除 | 第26-27页 |
| ·DNA序列测定及同源性分析 | 第27页 |
| ·全长捕获蛋白杂交体质粒的构建 | 第27页 |
| ·FMRP与NM23 H2的相互作用以及作用区域的定位 | 第27页 |
| ·真核表达克隆的构建 | 第27页 |
| ·细胞复苏及传代 | 第27-28页 |
| ·COS7细胞的瞬时转染 | 第28页 |
| ·培养细胞蛋白的提取 | 第28页 |
| ·Bradford法测定蛋白含量 | 第28-29页 |
| ·免疫沉淀 | 第29页 |
| ·Western Blot(Immunoblotting) | 第29-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-55页 |
| ·诱饵蛋白杂交体质粒的构建 | 第34-36页 |
| ·五月龄人胚海马酵母双杂交cDNA文库的鉴定 | 第36-37页 |
| ·酵母菌Y190、CG1945和L40的表型验证和诱饵蛋白自激活检测 | 第37-38页 |
| ·五月龄人胚海马酵母双杂交文库的筛选 | 第38页 |
| ·阳性克隆的测序结果及同源性比较 | 第38-42页 |
| ·FMR1与NDK／NM23 H2相互作用的验证 | 第42-44页 |
| ·FMR1与NM23 H2相互作用区域的定位 | 第44-45页 |
| ·FMRP蛋白和NM23 H2蛋白在COS7细胞中的表达 | 第45-49页 |
| ·细胞免疫共沉淀实验 | 第49-55页 |
| 4 讨论 | 第55-64页 |
| ·用酵母双杂交系统研究蛋白之间的相互作用 | 第55页 |
| ·FMRP与NM23 H2的相互作用区域 | 第55-56页 |
| ·利用免疫共沉淀方法在体内验证FMRP与NM23 H2的相互作用 | 第56-57页 |
| ·FMRP与NM23 H2的相互作用以及生物学意义 | 第57-64页 |
| 5 参考文献 | 第64-70页 |
| 第二章 运用酵母双杂交体系筛选与PS1和PS2相互作用的蛋白 | 第70-110页 |
| 1 前言 | 第70-76页 |
| ·研究背景 | 第70-75页 |
| ·研究目的 | 第75页 |
| ·研究内容 | 第75-76页 |
| 2 材料与方法 | 第76-78页 |
| ·诱饵蛋白重组质粒及其PS各种缺失体的构建 | 第76页 |
| ·全长捕获蛋白杂交体质粒的构建 | 第76页 |
| ·各种PS／pAS2.1和PS／pGAD424异构体重组质粒的构建 | 第76-77页 |
| ·假阳性相互作用的排除 | 第77页 |
| ·检测PS与Bcl2的相互作用 | 第77页 |
| ·PS与Bcl2的相互作用区域的定位 | 第77-78页 |
| 3 结果 | 第78-94页 |
| ·诱饵蛋白杂交体质粒的构建 | 第78-80页 |
| ·阳性克隆的测序结果及同源性比较 | 第80-86页 |
| ·全长捕获蛋白杂交体质粒pGAD424／Bcl2和pAS2.1／Bcl2的构建 | 第86-87页 |
| ·各种PS／pAS2.1和PS／pGAD424异构体的构建 | 第87页 |
| ·PS与Bcl2相互作用的检测以及作用区域的定位 | 第87-94页 |
| 4 讨论 | 第94-104页 |
| ·用酵母双杂交体系筛选与早老蛋白PS1和PS2的相互作用蛋白 | 第94页 |
| ·PS与Bcl-2的相互作用以及生物学意义 | 第94-104页 |
| 5 参考文献 | 第104-110页 |
| 总结 | 第110-112页 |
| 1 与FMRP相互作用蛋白的研究 | 第110页 |
| 2 与早老蛋白PS1和PS2相互作用蛋白的筛选和研究 | 第110-112页 |
| 文献综述 | 第112-137页 |
| 脆性X智力低下蛋白(FMRP)的分子生物学 | 第112-137页 |
| 附录 | 第137-139页 |
| 英文缩写 | 第137-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
