| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-30页 |
| ·植物细胞质雄性不育 | 第16-25页 |
| ·植物细胞质雄性不育特征及其分类 | 第16页 |
| ·叶绿体与植物细胞质雄性不育 | 第16-17页 |
| ·线粒体与植物细胞质雄性不育 | 第17-19页 |
| ·植物CMS 相关的线粒体基因的克隆策略 | 第19-22页 |
| ·植物CMS 相关的线粒体基因的功能分析 | 第22-25页 |
| ·植物CMS 相关的线粒体基因的转录 | 第22-23页 |
| ·植物CMS 相关的线粒体蛋白及作用特点 | 第23-25页 |
| ·稻瘟病抗性基因的研究 | 第25-28页 |
| ·稻瘟病研究的重要意义 | 第25-26页 |
| ·稻瘟病抗性基因的研究进展 | 第26-28页 |
| ·本研究的内容、目的及意义 | 第28-30页 |
| ·本研究的主要内容 | 第28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 第2章 HL-CMS 相关片段HL-SP1 的侧翼序列分析 | 第30-48页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·材料、试剂与设备 | 第30-33页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·部分PCR 引物 | 第32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-40页 |
| ·线粒体基因组DNA 的提取 | 第33页 |
| ·HL-sp1 5’端单引物扩增及片段克隆 | 第33-36页 |
| ·单引物HLSP1R6 扩增HL-sp1 5’端 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第34页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第34-35页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌及鉴定 | 第35-36页 |
| ·TAIL-PCR 扩增HL-sp1 的侧翼序列 | 第36-38页 |
| ·PCR 扩增 | 第36-38页 |
| ·TAIL-PCR 扩增产物的克隆与测序 | 第38页 |
| ·基因预测 | 第38页 |
| ·候选基因的细胞质特异性分析 | 第38-39页 |
| ·植物DNA 的微量快速提取 | 第38页 |
| ·PCR 分析 | 第38-39页 |
| ·候选基因在转录水平上的表达分析 | 第39-40页 |
| ·植物RNA 的提取 | 第39页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第39-40页 |
| ·cDNA 的PCR 扩增 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-46页 |
| ·YTA 线粒体及线粒体DNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·单引物HLSP1R6 扩增HL-sp1 5’端 | 第41页 |
| ·TAIL-PCR 扩增产物电泳结果分析 | 第41-43页 |
| ·TAIL-PCR 产物克隆分析 | 第43页 |
| ·测序结果分析 | 第43-44页 |
| ·基因预测结果及分析 | 第44-45页 |
| ·候选基因orf216 的细胞质特异性检测结果 | 第45页 |
| ·候选基因orf216 RNA 水平的表达分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·单引物HLSP1R6 扩增HL-sp1 5’端侧翼序列 | 第46页 |
| ·TAIL-PCR 扩增HL-sp1 的侧翼序列 | 第46-47页 |
| ·基因的预测、表达以及细胞质特异性分析 | 第47-48页 |
| 第3章 HL-CMS 不育基因ORF216 植物表达载体的构建及遗传转化 | 第48-66页 |
| ·引言 | 第48-49页 |
| ·材料、试剂与设备 | 第49-51页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·载体和菌株 | 第49页 |
| ·主要试剂及植物组织培养用培养基 | 第49-50页 |
| ·实验设备 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-57页 |
| ·水稻线粒体基因orf216 的克隆 | 第51-54页 |
| ·水稻线粒体信号肽DNA 片段与pCAMBIA1305.1 的组装 | 第52-54页 |
| ·带有线粒体信号肽的orf216 的超表达载体的构建 | 第54页 |
| ·根癌农杆菌EHA105 感受态细胞的制备、转化与鉴定 | 第54-55页 |
| ·农杆菌介导水稻的遗传转化 | 第55-56页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导及继代 | 第55页 |
| ·农杆菌的活化及悬浮 | 第55-56页 |
| ·愈伤组织的浸染及共培养 | 第56页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选、预分化及分化 | 第56页 |
| ·幼苗的生根壮苗及移栽 | 第56页 |
| ·转基因植株的分子检测以及GUS 染色 | 第56-57页 |
| ·转化植株的PCR 检测 | 第56页 |
| ·转基因植物的GUS 染色 | 第56-57页 |
| ·转基因植株目的基因转录水平表达分析 | 第57页 |
| ·实验结果与分析 | 第57-62页 |
| ·水稻线粒体信号肽序列的克隆 | 第57-58页 |
| ·HL-CMS 相关候选基因orf216 的表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·植物遗传转化与转基因植株的获得 | 第59页 |
| ·T_0 代转化植株的鉴定 | 第59-61页 |
| ·Hpt 基因的PCR 检测及GUS 染色 | 第59-61页 |
| ·候选基因的PCR 检测 | 第61页 |
| ·转基因植株中候选基因的表达分析 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第63-64页 |
| ·今后研究工作展望 | 第64-66页 |
| 第4章 稻瘟病新抗性基因P136 的干涉与亚细胞定位载体的构建及转化 | 第66-82页 |
| ·引言 | 第66页 |
| ·实验材料 | 第66-69页 |
| ·植物材料 | 第66页 |
| ·载体和菌株 | 第66-67页 |
| ·主要试剂及植物组织培养用培养基 | 第67-68页 |
| ·引物 | 第68页 |
| ·主要设备 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-72页 |
| ·Pi36 干涉载体及亚细胞定位载体构建 | 第69-70页 |
| ·载体构建策略 | 第69页 |
| ·制备目的片段 | 第69-70页 |
| ·双元载体DNA 的制备 | 第70页 |
| ·目的片段的连接、转化与鉴定 | 第70页 |
| ·根癌农杆菌EHA105 感受态细胞的制备、转化与鉴定 | 第70页 |
| ·农杆菌介导水稻的遗传转化 | 第70页 |
| ·农杆菌介导的烟草遗传转化以及细胞观察 | 第70-71页 |
| ·外植体的制备 | 第70页 |
| ·农杆菌的活化及悬浮 | 第70页 |
| ·共培养 | 第70页 |
| ·分化 | 第70-71页 |
| ·生根 | 第71页 |
| ·细胞观察 | 第71页 |
| ·基因枪法转化洋葱表皮细胞及观察 | 第71页 |
| ·转化植株的PCR 检测 | 第71页 |
| ·转基因水稻Pi36 基因RNA 水平上的荧光定量PCR 分析 | 第71-72页 |
| ·转化植株RNA 的提取 | 第71页 |
| ·cDNA 的合成 | 第71-72页 |
| ·荧光定量PCR 分析 | 第72页 |
| ·实验结果 | 第72-79页 |
| ·Pi36 5’端干涉载体 pI1 的构建 | 第72-73页 |
| ·Pi36 NBS 保守结构域干涉载体 pI2 的构建 | 第73-74页 |
| ·Pi36 3’端干涉载体 pI3 的构建 | 第74页 |
| ·Pi36 亚细胞定位载体p36YDW 的构建 | 第74-75页 |
| ·水稻以及烟草遗传转化、转基因植株的获得 | 第75-76页 |
| ·T_0 代转化植株的鉴定 | 第76-77页 |
| ·亚细胞定位观察 | 第77-78页 |
| ·pI1、pI2 及pI3 转化植株中Pi36 基因表达量的分析 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| ·今后工作展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 附录一: 相关溶液及试剂配制方法 | 第97-100页 |
| 附录二 在读期间发表的论文、参与的科研课题及学术活动 | 第100页 |
