扬子鳄基因组文库的构建
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-23页 |
| 1 扬子鳄概况 | 第9-16页 |
| ·命名和分类地位 | 第9-10页 |
| ·分布 | 第10-11页 |
| ·生活习性 | 第11-12页 |
| ·扬子鳄研究现状 | 第12-14页 |
| ·扬子鳄保护现状 | 第14页 |
| ·长兴扬子鳄自然繁育研究中心与长兴扬子鳄种群 | 第14-16页 |
| 2 基因组文库应用 | 第16-22页 |
| ·基因组文库概述 | 第16页 |
| ·克隆载体的发展史 | 第16-18页 |
| ·细菌人工染色体(BAC)文库的构建 | 第18-19页 |
| ·BAC文库的鉴定 | 第19页 |
| ·基因组文库的应用 | 第19-22页 |
| 3 本研究的立项依据、目的和意义 | 第22-23页 |
| 材料和方法 | 第23-35页 |
| 1 材料 | 第23-25页 |
| ·样品 | 第23页 |
| ·BAC载体和大肠杆菌菌株 | 第23-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第25页 |
| 2 方法和步骤 | 第25-35页 |
| ·高分子量DNA(HWM DNA)的制备 | 第26-27页 |
| ·血液样品处理及红细胞裂解 | 第26页 |
| ·细胞包埋处理 | 第26页 |
| ·凝胶包埋块(plugs)的处理 | 第26-27页 |
| ·预电泳 | 第27页 |
| ·高分子量DNA的不完全酶切 | 第27-28页 |
| ·合适大小DNA片段的选择 | 第28页 |
| ·DNA片段的回收 | 第28-29页 |
| ·DNA条带的进一步浓缩 | 第28-29页 |
| ·电洗脱回收DNA片段 | 第29页 |
| ·DNA连接与连接产物脱盐 | 第29-30页 |
| ·DNA连接 | 第29-30页 |
| ·连接产物脱盐 | 第30页 |
| ·电转化 | 第30-31页 |
| ·电转化 | 第30-31页 |
| ·涂板及蓝白斑筛选 | 第31页 |
| ·插入片段大小的检测 | 第31页 |
| ·BAC克隆挑取及保存 | 第31页 |
| ·扬子鳄BAC文库的检测和鉴定 | 第31-35页 |
| ·BAC克隆稳定性检测 | 第31-32页 |
| ·平均插入片段大小的检测 | 第32-33页 |
| ·扬子鳄BAC文库筛选系统的建立 | 第33-35页 |
| 结果与分析 | 第35-43页 |
| 1 预电泳 | 第35-36页 |
| 2 不完全消化最佳酶切量的确定 | 第36-37页 |
| 3 适合大小DNA片段的选择和回收 | 第37-39页 |
| 4 电转化最佳参数的确定 | 第39页 |
| 5 插入片段大小检测 | 第39-40页 |
| 6 文库概况 | 第40-41页 |
| 7 BAC克隆稳定性检测结果 | 第41-43页 |
| 讨论 | 第43-46页 |
| 1 基因组BAC文库构建中的几个关键问题 | 第43-45页 |
| ·高分子量DNA(HMW DNA)的制备 | 第43页 |
| ·片段选择与基因组平均插入片段的关系 | 第43-44页 |
| ·电转化参数与插入片段大小的关系 | 第44-45页 |
| 2 结论和研究展望 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-55页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第55-56页 |
| 感谢 | 第56页 |
