| 内容提要 | 第1-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-14页 |
| 1 基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs) | 第8-13页 |
| ·MMPs家族 | 第8页 |
| ·MT1-MMPs的生物学性质 | 第8-9页 |
| ·MT1-MMP生理功能及相关疾病 | 第9-12页 |
| ·MMPs的抑制剂研究进展 | 第12-13页 |
| 2 本论文的研究目的和策略 | 第13-14页 |
| 第二章 以MT1-MMP为筛选靶点筛选MT1-MMP的亲和短肽 | 第14-33页 |
| 1 前言 | 第14-18页 |
| ·MT1-MMP | 第14页 |
| ·噬菌体肽库 | 第14-16页 |
| ·噬菌体展示肽库的应用及研究进展: | 第16-18页 |
| 2 实验材料与方法 | 第18-22页 |
| ·材料、仪器和试剂 | 第19-22页 |
| 3 实验方法 | 第22-27页 |
| ·靶分子的准备 | 第22页 |
| ·铺板ER2738细胞的制备 | 第22页 |
| ·噬菌体滴度测定 | 第22-23页 |
| ·重组的MT1-MMP催化结构域为靶点筛选MT1-MMP的亲和肽 | 第23-25页 |
| ·ELISA检测筛选后获得的噬菌体克隆与MT1-MMP的结合活性 | 第25-26页 |
| ·ELISA法测定筛选的噬菌体肽与MT1-MMP之间的KD值 | 第26页 |
| ·测序噬菌体单链DNA的提取 | 第26-27页 |
| 4 结果与讨论 | 第27-32页 |
| ·肽库的亲和筛选 | 第27-29页 |
| ·筛选的噬菌体肽和MT1-MMP特异小肽之间解离常数Kd值的测定 | 第29-31页 |
| ·筛选的亲和小肽的氨基酸序列分析 | 第31-32页 |
| 5 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 以MT1-MMP表面特异肽段为筛选靶点筛选MT1-MMP的亲和短肽及其亲和性质研究 | 第33-55页 |
| 1 前言 | 第33-38页 |
| ·MT1-MMP亲和小肽的选择 | 第33-37页 |
| ·以此靶序列为靶点,筛选噬菌体展示肽库得到的氨基酸序列分析 | 第37-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-42页 |
| ·材料、仪器和试剂 | 第38-42页 |
| 3 实验方法: | 第42-45页 |
| ·肽的固相合成(手工) | 第42-43页 |
| ·ELISA检测亲和力方法如前章方法中所述。 | 第43页 |
| ·细胞增殖实验: | 第43-44页 |
| ·三维培养实验 | 第44页 |
| ·细胞免疫荧光实验: | 第44-45页 |
| ·细胞蛋白的提取 | 第45页 |
| ·蛋白印记(Western Blotting) | 第45页 |
| 4 结果 | 第45-52页 |
| ·筛选得到的短肽的合成 | 第45-46页 |
| ·亲和肽与靶分子的亲和力检测 | 第46-48页 |
| ·生物素化短肽对MT1-MMP的特异性 | 第48-49页 |
| ·生物素化短肽对MT1-MMP的抑制性检测 | 第49页 |
| ·细胞水平上检测生物素化短肽对MT1-MMP的作用研究 | 第49-51页 |
| ·生物素化小肽对MT1-MMP细胞水平上的标记 | 第51-52页 |
| 5 讨论 | 第52-55页 |
| Reference | 第55-58页 |
| 摘要 | 第58-60页 |
| ABSTRACT | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
