| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 英文缩略表 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-27页 |
| ·RNAi 的研究背景 | 第15-16页 |
| ·RNAi 系统的特征 | 第16-17页 |
| ·RNAi 作用的靶基因位点有选择性也就是序列特异性 | 第16页 |
| ·RNAi 的作用迅速，效率高 | 第16页 |
| ·RNAi 作用需要ATP | 第16-17页 |
| ·具有高稳定性 | 第17页 |
| ·可传播性和可遗传性 | 第17页 |
| ·RNAi 效应的依赖性 | 第17页 |
| ·周期短，方法简便，操作简单 | 第17页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性 | 第17-19页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性的特点 | 第17-18页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性是转录后基因沉默的结果 | 第18-19页 |
| ·RNAi 的机制及其相关的酶 | 第19-22页 |
| ·植物中 RNAi 介导方法 | 第22-23页 |
| ·病毒介导法 | 第22页 |
| ·hpRNA 介导法 | 第22-23页 |
| ·hpRNA 与RNA 介导的基因沉默 | 第23-24页 |
| ·本研究的立题依据和主要研究内容 | 第24-27页 |
| ·立题依据 | 第24-26页 |
| ·本研究的主要内容 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-43页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·毒源 | 第27页 |
| ·供试植物 | 第27页 |
| ·菌株、质粒 | 第27页 |
| ·常用缓冲液及培养基的配制 | 第27页 |
| ·常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-43页 |
| ·不同目的片段的获得 | 第27-29页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第28-29页 |
| ·中间载体pUC19-550 和pROKII-550 的构建 | 第29-33页 |
| ·506p 的DNA 片段和pUC19、pROK II 质粒的酶切 | 第29页 |
| ·506p 的DNA 片段分别和pUC19、pROK II 质粒的连接 | 第29-30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA 向大肠杆菌中转化(热激法) | 第31页 |
| ·转化菌落PCR 鉴定 | 第31页 |
| ·质粒DNA 的大量提取(碱裂解法) | 第31-33页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第33页 |
| ·不同长度的目的片段与中间载体pROKII-550 的连接 | 第33页 |
| ·含有不同反向重复结构的重组质粒向大肠杆菌的转化(热激法) | 第33页 |
| ·含有不同反向重复结构的重组质粒转化菌落的PCR 鉴定 | 第33-35页 |
| ·含有不同反向重复结构的重组质粒 DNA 的大量提取(碱裂解法) | 第35页 |
| ·含有不同反向重复结构的重组质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·含有不同反向重复结构的重组质粒向农杆菌转化(冻融法) | 第35页 |
| ·目的基因向烟草中的转化及植株再生 | 第35-36页 |
| ·植物总DNA 的提取(C11AB 法)及PCR 检测 | 第36-37页 |
| ·植物总DNA 的提取(cTAB 法) | 第36页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第36-37页 |
| ·转基因植株的抗病性鉴定及ELISA 检测 | 第37页 |
| ·转基因植株的抗病性鉴定 | 第37页 |
| ·ELISA 检测 | 第37页 |
| ·转基因植物的Southern blot 分析 | 第37-40页 |
| ·植物总DNA 的酶切 | 第37-38页 |
| ·DNA 凝胶电泳 | 第38页 |
| ·转膜 | 第38页 |
| ·探针的制备 | 第38-40页 |
| ·杂交 | 第40页 |
| ·转基因植株总RNA 的提取及Northern blot 分析 | 第40-43页 |
| ·植物总RNA 的提取(Trizol 一步提取法) | 第40页 |
| ·在含有甲醛的凝胶上进行RNA 电泳 | 第40-41页 |
| ·转膜 | 第41-42页 |
| ·探针制备 | 第42页 |
| ·杂交 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-59页 |
| ·目的片段的获得 | 第43页 |
| ·目的片段的扩增和酶切 | 第43页 |
| ·质粒DNA 酶切 | 第43页 |
| ·重组克隆载体的构建 | 第43-49页 |
| ·重组中间载体pUC19-550 和pROKII-550 的菌落PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组中间载体pUC19-550 和：pROK II-550 质粒的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·pROK-4:1、pROK-2:1、pROK-1:1、pROK-1:2、 pROK-1：4 和pROK-1：8 植物表达载体的菌落PCR 鉴定 | 第45-49页 |
| ·转化植株的获得 | 第49-50页 |
| ·转化植株的PCR 检测 | 第50-53页 |
| ·转基因植株的抗病性分析 | 第53-56页 |
| ·转基因植株的SOUTHERN BLOT 分析 | 第56-57页 |
| ·转基因(非转基因)植株DNA 的酶切 | 第56页 |
| ·转基因烟草的Southern blot，分析 | 第56-57页 |
| ·转基因植株的Northem blot 分析 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-74页 |
| 附录I 常用缓冲液及培养基的配制 | 第74-79页 |
| 附录II 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第79-81页 |
| 附录III 质粒图谱 | 第81-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 硕士研究生阶段发表的论文 | 第85页 |
