| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一章 转基因家蚕综述 | 第14-37页 |
| 1.家蚕转基因总体研究 | 第14-16页 |
| 2.转基因载体 | 第16-23页 |
| ·基于转座子的转基因载体 | 第16-21页 |
| ·基于minos转座子的转基因载体 | 第21-22页 |
| ·基因打靶载体 | 第22页 |
| ·其它转基因载体 | 第22-23页 |
| 3.外源基因导入方法 | 第23-28页 |
| ·显微注射法 | 第23-24页 |
| ·压力渗透导入法 | 第24-25页 |
| ·精子介导法导入外源DNA | 第25-26页 |
| ·基因枪轰击 | 第26页 |
| ·脉冲场胶电泳转导法 | 第26-27页 |
| ·电穿孔法导入法 | 第27页 |
| ·重组病毒介导法 | 第27-28页 |
| 4.转基因家蚕的筛选 | 第28-29页 |
| 5.家蚕转基因体系的应用 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-37页 |
| 第二章 家蚕RNAi研究及利用RNAi抑制BmNPV增殖的研究进展 | 第37-51页 |
| 1.RNAi的发现及其作用机制 | 第37-41页 |
| ·RNAi的发现 | 第37-38页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第38-39页 |
| ·RNAi的作用特点 | 第39-41页 |
| 2.利用RNAi抑制病毒的复制 | 第41页 |
| 3.家蚕核型多角体病毒 | 第41-44页 |
| 4.在家蚕中开展的RNAi的研究 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 第三章 研究目的与内容 | 第51-53页 |
| 1.研究目的 | 第51页 |
| 2.研究内容 | 第51-53页 |
| 第四章 一般材料与方法 | 第53-65页 |
| 1 一般材料 | 第53-54页 |
| ·生物材料 | 第53页 |
| ·工具酶 | 第53页 |
| ·培养基及抗生素 | 第53页 |
| ·其它试剂 | 第53页 |
| ·试剂盒 | 第53-54页 |
| ·核酸引物 | 第54页 |
| ·测序 | 第54页 |
| 2 试剂配制 | 第54-56页 |
| ·培养基 | 第54页 |
| ·缓冲液和常用溶液、贮存液 | 第54-56页 |
| 3 常用仪器 | 第56-57页 |
| 4 常用方法 | 第57-65页 |
| ·DNA的酶切反应体系 | 第57页 |
| ·DNA的连接反应体系 | 第57页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第57-58页 |
| ·连接产物的转化 | 第58页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第58页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第58页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第58-59页 |
| ·目的片段的分离和回收 | 第59页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第59-60页 |
| ·定量PCR(Quantitative PCR,qPCR) | 第60页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第60页 |
| ·DNA探针标记 | 第60-61页 |
| ·Dot Bloting | 第61页 |
| ·免疫检测 | 第61页 |
| ·DNA/RNA的共提取 | 第61-62页 |
| ·反转录 | 第62-63页 |
| ·细胞的培养和保存 | 第63页 |
| ·细胞转染 | 第63-64页 |
| ·基因枪轰击导入外源基因 | 第64-65页 |
| 第五章 体外水平的RNAi对BmNPV增殖抑制的效果比较 | 第65-86页 |
| 1 材料方法 | 第65-73页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-73页 |
| 2 结果 | 第73-82页 |
| ·构建转基因载体的鉴定 | 第73-74页 |
| ·稳定转化细胞的筛选 | 第74-75页 |
| ·siRNA在家蚕细胞中的转染效率 | 第75-76页 |
| ·稳定转化细胞对BmNPV的复制的抑制作用 | 第76-78页 |
| ·转染不同siRNA的细胞对BmNPV抑制的比较 | 第78-82页 |
| 3 讨论 | 第82-85页 |
| ·表达dsRNA的转化细胞对BmNPV的抑制 | 第82-83页 |
| ·siRNA的转染效率 | 第83页 |
| ·不同siRNA对BmNPV的干扰结果及作用特点 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-86页 |
| 第六章 转基因家蚕制作、筛选及鉴定 | 第86-100页 |
| 1 材料方法 | 第86-88页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-88页 |
| 2 研究结果 | 第88-95页 |
| ·不同基因导入方法对蚕卵孵化率的影响 | 第88页 |
| ·G418筛选转基因蚕的效果比较 | 第88-90页 |
| ·转基因蚕的荧光观察 | 第90-93页 |
| ·G0代转基因蚕的分子鉴定 | 第93-95页 |
| ·G1代转基因蚕卵的孵化率比较 | 第95页 |
| 3 讨论 | 第95-98页 |
| ·外源基因导入的比较 | 第95-96页 |
| ·转基因家蚕的筛选 | 第96-97页 |
| ·外源DNA在转基因家蚕中遗传特点 | 第97页 |
| ·外源基因的表达水平在基因组中的位置效应 | 第97页 |
| ·转基因蚕的孵化率 | 第97页 |
| ·不同性别家蚕对G418的抗性 | 第97-98页 |
| ·转基因家蚕抗BmNPV品系的筛选 | 第98页 |
| 参考文献 | 第98-100页 |
| 第七章 转基因家蚕对BmNPV的抗性 | 第100-109页 |
| 1 材料方法 | 第100-102页 |
| ·材料 | 第100-101页 |
| ·方法 | 第101-102页 |
| 2 研究结果 | 第102-106页 |
| ·G2代转基因2龄蚕对BmNPV抗性 | 第102页 |
| ·G2代转基因蚕蛹对BmNPV的抗性 | 第102-103页 |
| ·G3代转基因5龄蚕对BmNPV的抗性 | 第103-105页 |
| ·G2代转基因蚕的茧成量调查 | 第105-106页 |
| 3 分析与讨论 | 第106-108页 |
| ·RNAi靶基因的选择 | 第106页 |
| ·G2代转基因蚕及蛹对BmNPV的抗性 | 第106页 |
| ·G3代转基因蚕对BmNPV的抗性 | 第106-107页 |
| ·转基因蚕对BmNPV表现的抗性不一致性 | 第107页 |
| ·转基因家蚕的茧层量 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-109页 |
| 结论 | 第109-110页 |
| 附录 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
