| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 1 绪论 | 第14-32页 |
| ·木质素的生物降解概述 | 第14-15页 |
| ·木质素的组成 | 第14页 |
| ·木质素的生物降解 | 第14-15页 |
| ·木材白腐菌 | 第15-16页 |
| ·白腐菌的生物学背景 | 第15-16页 |
| ·白腐菌应用与研究现状 | 第16页 |
| ·白腐菌降解木质素酶系统 | 第16-26页 |
| ·锰过氧化物酶(MnP)及其降解机制 | 第17-24页 |
| ·漆酶(laccase)及其降解机制 | 第24-25页 |
| ·木质素过氧化物酶(LiP)及其降解机制 | 第25-26页 |
| ·锰过氧化物酶MnP的分子生物学研究进展 | 第26-30页 |
| ·MnP基因的克隆 | 第26-28页 |
| ·MnP基因的表达 | 第28-30页 |
| ·研究目的和意义 | 第30-31页 |
| ·研究的主要内容 | 第31页 |
| ·课题来源 | 第31-32页 |
| 2 偏肿拟栓菌及红平菇木质素降解酶系统产酶活性的检测 | 第32-41页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·供试菌种 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·菌种的液体培养 | 第33页 |
| ·酶活测定方法 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-39页 |
| ·两种白腐菌产LiP测定结果 | 第34页 |
| ·红平菇酶活测定结果 | 第34-37页 |
| ·偏肿拟栓菌酶活测定结果 | 第37-39页 |
| ·本章小结 | 第39-41页 |
| 3 偏肿拟栓菌锰过氧化物酶全长cDNA的克隆及序列分析 | 第41-74页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·供试菌种 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·试验引物 | 第41-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-50页 |
| ·主要培养基 | 第42页 |
| ·菌丝的收集 | 第42页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第42-43页 |
| ·简并PCR | 第43页 |
| ·丝状真菌总RNA的提取及DNA的消化 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR | 第44-45页 |
| ·PCR产物的凝胶回收 | 第45-46页 |
| ·目的基因片段与T载体的连接 | 第46-47页 |
| ·3′RACE | 第47-48页 |
| ·5′RACE | 第48-49页 |
| ·偏肿拟栓菌MnP全长cDNA的基因序列分析 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-72页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·简并PCR | 第51页 |
| ·总RNA的提取 | 第51-52页 |
| ·RT-PCR扩增cDNA基因片段 | 第52-54页 |
| ·3′RACE | 第54-55页 |
| ·5′RACE | 第55-57页 |
| ·拼接得到偏肿拟栓菌MnP全长cDNA序列 | 第57-59页 |
| ·偏肿拟栓菌MnP的cDNA核苷酸序列的同源性比较 | 第59-60页 |
| ·偏肿拟栓菌MnP蛋白结构分析 | 第60-72页 |
| ·本章小结 | 第72-74页 |
| 4 偏肿拟栓菌锰过氧化物酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第74-91页 |
| ·材料 | 第74-75页 |
| ·菌种及质粒 | 第74-75页 |
| ·主要试剂 | 第75页 |
| ·主要仪器设备 | 第75页 |
| ·方法 | 第75-82页 |
| ·培养基 | 第75页 |
| ·偏肿拟栓菌MnP的完整CDS序列扩增 | 第75-76页 |
| ·重组质粒的构建 | 第76-80页 |
| ·转化Pichia pastoris | 第80-81页 |
| ·转化Pichia pastoris后的PCR验证 | 第81页 |
| ·含MnP的酵母重组子的诱导表达 | 第81-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-89页 |
| ·偏肿拟栓菌MnP的完整CDS序列扩增 | 第82-84页 |
| ·重组质粒的构建 | 第84-86页 |
| ·转化Pichia pastoris | 第86-88页 |
| ·重组MnP的诱导表达 | 第88-89页 |
| ·本章小结 | 第89-91页 |
| 结论 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 附录1 偏肿拟栓菌简并PCR序列比对结果 | 第101-102页 |
| 附录2 偏肿拟栓菌RT-PCR序列比对结果 | 第102-103页 |
| 附录3 偏肿拟栓菌3′RACE序列及比对结果 | 第103-104页 |
| 附录4 5′RACE序列及比对结果 | 第104-105页 |
| 附录5 重组质粒测序结果与PCR全长序列比对结果 | 第105-107页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
