| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-25页 |
| ·流感概述 | 第9-10页 |
| ·流感病毒概述 | 第10-13页 |
| ·流感病毒的结构 | 第10页 |
| ·流感病毒的复制 | 第10-11页 |
| ·流感病毒的变异 | 第11页 |
| ·流感病毒编码的蛋白质 | 第11-13页 |
| ·非结构蛋白NS1 | 第13-19页 |
| ·NS1 蛋白的进化与分类 | 第13-14页 |
| ·NS1 蛋白的结构 | 第14-15页 |
| ·NS1 蛋白在宿主细胞中的定位 | 第15页 |
| ·NS1 蛋白的功能 | 第15-19页 |
| ·NS1 蛋白的应用前景 | 第19-20页 |
| ·NS1 蛋白在流感鉴别诊断上的应用 | 第19页 |
| ·针对NS1 蛋白的病毒疫苗 | 第19-20页 |
| ·针对NS1 蛋白结构上某些功能位点设计抗病毒药物 | 第20页 |
| ·利用重组病毒表达截短的NS1 来辅助肿瘤疾病的治疗 | 第20页 |
| ·蛋白质相互作用研究方法 | 第20-22页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第21页 |
| ·GST Pull Down 技术 | 第21页 |
| ·免疫荧光共定位技术 | 第21-22页 |
| ·串联亲和纯化技术 | 第22页 |
| ·Nucleolin 结构与生物学功能 | 第22-23页 |
| ·研究的目的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 2009 及1918 流感病毒NS1 蛋白的克隆及真核表达 | 第25-41页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·载体、菌株与细胞系 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-27页 |
| ·试验方法 | 第27-34页 |
| ·2009 和1918 流感病毒NS1 基因生物信息学分析 | 第27-28页 |
| ·克隆流感病毒NS1 基因 | 第28-31页 |
| ·构建NS1 真核表达载体TAPNS12009、HANS12009、HANS11918、GFPNS12009、GFPNS11918 | 第31页 |
| ·准备转染质粒 | 第31-32页 |
| ·A549 细胞培养与冻存 | 第32页 |
| ·NS1 真核表达载体转染A549 细胞 | 第32-33页 |
| ·优化NS1 真核表达转染条件 | 第33页 |
| ·Western Blot 检测 | 第33-34页 |
| ·试验结果 | 第34-38页 |
| ·2009 和1918 流感病毒NS1 基因生物信息学分析 | 第34页 |
| ·NS1 基因的克隆 | 第34-36页 |
| ·真核表达载体 TAPNS12009 、HANS12009 、HANS11918、GFPNS12009、GFPNS11918 的构建 | 第36-37页 |
| ·NS1 真核表达载体转染A549 细胞 | 第37页 |
| ·NS1 真核表达转染条件的优化 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·2009NS1 和1918NS1 差异比较 | 第38-39页 |
| ·NS1 蛋白真核表达 | 第39页 |
| ·小结 | 第39-41页 |
| 第三章 流感病毒NS1 蛋白对细胞生长的调控 | 第41-51页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·细胞 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-43页 |
| ·形态学观察表达NS1 蛋白的A549 细胞 | 第41-42页 |
| ·Annexin V 染色检测表达NS1 蛋白的A549 细胞凋亡 | 第42页 |
| ·流式细胞仪检测表达NS1 蛋白的A549 细胞周期 | 第42-43页 |
| ·Western Blot 检测细胞周期关键蛋白差异 | 第43页 |
| ·试验结果 | 第43-47页 |
| ·表达NS1 蛋白的A549 细胞的形态学观察 | 第43-44页 |
| ·Annexin V 染色检测表达NS1 蛋白的A549 细胞凋亡 | 第44-45页 |
| ·流式细胞仪检测表达NS1 蛋白的A549 细胞周期 | 第45-46页 |
| ·Western blot 检测细胞周期关键蛋白差异 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·NS1 蛋白对A549 细胞凋亡的影响 | 第47-48页 |
| ·NS1 蛋白对A549 细胞周期的影响 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-51页 |
| 第四章 流感病毒2009NS1 蛋白与Nucleolin 的相互作用 | 第51-61页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·细胞和菌种 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51-52页 |
| ·试验方法 | 第52-55页 |
| ·TAPNS1 蛋白在A549 细胞中的表达及纯化 | 第52-53页 |
| ·Western Blot 检测Nucleolin 与TAPNS1 相互作用 | 第53页 |
| ·GST Pull Down 验证NS1 与Nucleolin 的相互作用 | 第53-55页 |
| ·试验结果 | 第55-58页 |
| ·TAPNS1 融合蛋白的表达及纯化 | 第55页 |
| ·Western Blot 检测Nucleolin 与TAPNS1 相互作用 | 第55-56页 |
| ·NS1 与Nucleolin 的相互作用验证 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·GST 融合蛋白的表达纯化 | 第58页 |
| ·NS1 蛋白的相互作用 | 第58-59页 |
| ·NS1 蛋白与Nucleolin 蛋白的相互作用 | 第59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第五章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录一：主要化学试剂 | 第71-72页 |
| 附录二：主要仪器 | 第72-73页 |
| 附录三：缩略词 | 第73页 |
