| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-13页 |
| 专业名词缩写中英文对照表 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一章 标准化鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层细胞的操作程序 | 第16-55页 |
| 1 材料 | 第17-19页 |
| ·实验用鼠 | 第17页 |
| ·耗材 | 第17页 |
| ·解剖器械 | 第17-18页 |
| ·培养基和因子 | 第18页 |
| ·检测试剂 | 第18-19页 |
| ·仪器设备 | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-32页 |
| ·小鼠胚胎的取材 | 第19页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞的分离、培养、传代 | 第19-20页 |
| ·鼠胚胎成纤维细胞的增殖动力学 | 第20页 |
| ·Mitomycin C处理时间 | 第20页 |
| ·洗涤丝裂霉素C的操作 | 第20-21页 |
| ·液相色谱—电喷雾串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测丝裂霉素C的残留量 | 第21-22页 |
| ·支持密度 | 第22页 |
| ·人胚胎干细胞的培养 | 第22页 |
| ·核型的检测 | 第22-23页 |
| ·比较基因组杂交(CGH) | 第23-26页 |
| ·DNA指纹的检测 | 第26-27页 |
| ·HLA分型和ABO血型的检测 | 第27-28页 |
| ·特异性标记的免疫组化检测 | 第28页 |
| ·特异性表达基因的检测 | 第28-29页 |
| ·端粒酶的检测 | 第29-31页 |
| ·体外分化能力的免疫组化检测 | 第31-32页 |
| ·体外分化能力各胚层表达基因的检测 | 第32页 |
| ·体内分化形成畸胎瘤的检测 | 第32页 |
| 3.结果 | 第32-37页 |
| ·微生物污染的检测 | 第32-33页 |
| ·不同胎龄胚胎的选择 | 第33页 |
| ·鼠胚胎成纤维细胞的增殖动力学 | 第33-34页 |
| ·丝裂霉素C处理时间 | 第34页 |
| ·支持密度 | 第34-35页 |
| ·DNA指纹的检测 | 第35页 |
| ·HLA分型和ABO血型的检测 | 第35-36页 |
| ·不同洗涤步骤的比较 | 第36页 |
| ·鼠饲养层细胞管理数据库的建立 | 第36-37页 |
| 4.讨论 | 第37-38页 |
| 5.附图 | 第38-55页 |
| 第二章 残留的丝裂霉素C对人胚胎干细胞体外培养的毒性研究 | 第55-96页 |
| 1 材料 | 第56-58页 |
| ·人胚胎干细胞 | 第56-57页 |
| ·耗材 | 第57页 |
| ·培养基和因子 | 第57页 |
| ·检测试剂 | 第57-58页 |
| ·仪器设备 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-69页 |
| ·液相色谱—电喷雾串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测丝裂霉素C的残留量 | 第58-59页 |
| ·细胞培养 | 第59-60页 |
| ·染色体核型的G显带分析 | 第60-61页 |
| ·比较基因组杂交(CGH) | 第61-64页 |
| ·PCR产物测序 | 第64页 |
| ·单链DNA的ELISA检测 | 第64-65页 |
| ·正常核型和异常核型人胚胎干细胞特异性表达基因的检测 | 第65-66页 |
| ·体外分化能力的免疫组化检测 | 第66-67页 |
| ·流式检测细胞周期 | 第67页 |
| ·流式检测细胞凋亡 | 第67-68页 |
| ·DNA损伤和修复反应通路关键基因的荧光实时定量PCR检测 | 第68-69页 |
| 3.结果 | 第69-76页 |
| ·液相色谱—电喷雾串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测丝裂霉素C的残留量 | 第69-70页 |
| ·较高剂量丝裂霉素C处理人胚胎干细胞较短时间,形态学和核型的改变 | 第70页 |
| ·较低剂量丝裂霉素C处理人胚胎干细胞较长时间,形态学和核型的改变 | 第70-71页 |
| ·核型变化的分析 | 第71-72页 |
| ·DNA损伤和修复通路关键基因PCR产物测序 | 第72-73页 |
| ·单链DNA(single strand DNA,ssDNA)的ELISA检测 | 第73-74页 |
| ·正常核型和异常核型人胚胎干细胞的生物学比较 | 第74页 |
| ·DNA损伤和修复反应通路关键基因的荧光实时定量PCR检测 | 第74-76页 |
| 4.讨论 | 第76-77页 |
| 5.附图 | 第77-96页 |
| 结论 | 第96-97页 |
| 课题创新性 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-102页 |
| 综述 | 第102-108页 |
| 附录 | 第108-119页 |
| 致谢 | 第119-121页 |
| 个人简历及攻读学位期间的主要研究成果 | 第121-123页 |
| 附件 | 第123-130页 |
