| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| ·马铃薯现状介绍 | 第12-13页 |
| ·马铃薯概述 | 第12页 |
| ·世界马铃薯生产现状 | 第12页 |
| ·马铃薯研究趋势 | 第12-13页 |
| ·世界马铃薯贸易 | 第13页 |
| ·我国马铃薯生产 | 第13页 |
| ·有害生物风险分析(PRA) | 第13-15页 |
| ·有害生物风险分析(PRA)研究现状 | 第13-15页 |
| ·有害生物风险分析方法分类 | 第14-15页 |
| ·有害生物定性风险评估方法 | 第14页 |
| ·有害生物定量风险评估方法 | 第14-15页 |
| ·有害生物风险分析软件工具 | 第15页 |
| ·国内有害生物风险分析(PRA)研究情况 | 第15页 |
| ·马铃薯病毒病 | 第15-19页 |
| ·植物病毒简介 | 第15-16页 |
| ·马铃薯的退化 | 第16页 |
| ·马铃薯病毒 | 第16-19页 |
| ·马铃薯M病毒 | 第17页 |
| ·马铃薯纺锤块茎类病毒 | 第17-18页 |
| ·番茄斑萎病毒 | 第18页 |
| ·马铃薯S病毒 | 第18-19页 |
| ·马铃薯病毒检测研究概况 | 第19-23页 |
| ·生物学试验方法 | 第19页 |
| ·电子显微镜技术 | 第19-20页 |
| ·免疫学方法 | 第20-21页 |
| ·双抗体夹心法 | 第20页 |
| ·硝酸纤维素膜法 | 第20-21页 |
| ·快速酶联免疫吸附法 | 第21页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第21-23页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第21-22页 |
| ·PCR和RT-PCR | 第21-22页 |
| ·PCR反应的影响因素 | 第22页 |
| ·核酸斑点杂交技术 | 第22页 |
| ·双链RNA技术 | 第22-23页 |
| ·基因芯片技术 | 第23页 |
| ·马铃薯病毒病防治策略研究概况 | 第23-24页 |
| ·试验目的与意义 | 第24-26页 |
| ·从法国、俄罗斯、荷兰引种马铃薯目的与意义 | 第24页 |
| ·引种过程中有害生物风险分析意义 | 第24-25页 |
| ·马铃薯病毒检测技术研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 马铃薯有害生物风险分析 | 第26-45页 |
| 1.进境马铃薯有害生物风险分析方法 | 第26-32页 |
| ·起始阶段 | 第26页 |
| ·评估阶段 | 第26-32页 |
| ·管理阶段 | 第32页 |
| 2.进境马铃薯有害生物风险分析结果 | 第32-43页 |
| ·法国进境马铃薯有害生物风险分析 | 第32-35页 |
| ·法国进境马铃薯上有害生物的确定 | 第32-33页 |
| ·法国进境马铃薯上限定的有害生物名单 | 第33-34页 |
| ·法国进境马铃薯上QP和RNOP的确定 | 第34-35页 |
| ·荷兰进境马铃薯有害生物风险分析 | 第35-39页 |
| ·荷兰进境马铃薯上有害生物的确定 | 第35-36页 |
| ·荷兰进境马铃薯上限定的有害生物名单 | 第36-37页 |
| ·荷兰进境马铃薯上QP和RNQP的确定 | 第37-39页 |
| ·俄罗斯进境马铃薯有害生物风险分析 | 第39-42页 |
| ·俄罗斯进境马铃薯上有害生物的确定 | 第39页 |
| ·俄罗斯进境马铃薯上限定的有害生物名单 | 第39-40页 |
| ·俄罗斯进境马铃薯上QP和RNQP的确定 | 第40-42页 |
| ·风险管理方案及其效率评估 | 第42-43页 |
| ·检疫审批和产地检疫证明 | 第42-43页 |
| ·种薯质量要求及必要处理 | 第43页 |
| ·入境检疫和隔离试种 | 第43页 |
| ·脱毒苗的引进 | 第43页 |
| 3.讨论 | 第43-45页 |
| ·本研究中有害生物风险分析的科学性 | 第43-44页 |
| ·本研究中有害生物风险分析的问题 | 第44-45页 |
| 第三章 马铃薯病毒检测技术研究 | 第45-68页 |
| 1.材料与方法 | 第45-51页 |
| ·主要试剂盒仪器 | 第45-46页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·仪器 | 第45-46页 |
| ·常用缓冲液配方 | 第46页 |
| ·供试材料 | 第46-47页 |
| ·材料的采集 | 第46页 |
| ·DAS-ELISA检测材料带毒情况 | 第46-47页 |
| ·供试材料保存 | 第47页 |
| ·马铃薯病毒RNA提取 | 第47-48页 |
| ·试剂盒提取植物总RNA | 第47-48页 |
| ·RNAiso Plus试剂提取总RNA | 第48页 |
| ·总RNA完整性的检测 | 第48页 |
| ·马铃薯病毒RT-PCR的检测 | 第48-51页 |
| ·马铃薯病毒引物的设计 | 第48页 |
| ·马铃薯病毒RT-PCR检测体系的建立 | 第48-50页 |
| ·三种马铃薯病毒RT-PCR体系优化 | 第50页 |
| ·PVM单重RT-PCR体系的优化 | 第50页 |
| ·TSWV单重RT-CPR体系的优化 | 第50页 |
| ·PSTVd单重RT-CPR体系的优化 | 第50页 |
| ·RT-PCR产物回收及测序 | 第50-51页 |
| ·双重RT-PCR体系检测 | 第51页 |
| ·三重RT-PCR体系检测 | 第51页 |
| 2.试验结果与分析 | 第51-64页 |
| ·病毒RNA提取 | 第51-52页 |
| ·马铃薯病毒RT-PCR检测 | 第52-60页 |
| ·PVM、TSWV、PSTVd的单重RT-PCR检测 | 第52-55页 |
| ·退火温度的影响 | 第52-53页 |
| ·Mg~(2+)浓度对PCR的影响 | 第53-54页 |
| ·cDNA量对PCR扩增的影响 | 第54-55页 |
| ·PVM、TSWV、PSTVd、PVS的双重RT-PCR检测 | 第55-58页 |
| ·反转录体系中不同下游引物加入量的优化 | 第55-57页 |
| ·PCR体系中Mg~(2+)浓度的优化 | 第57-58页 |
| ·PVM、PVS、TSWV、PSTVd的三重RT-PCR检测 | 第58-60页 |
| ·反转录体系中不同下游引物量的优化 | 第58-59页 |
| ·PCR体系中Mg~(2+)浓度的优化 | 第59-60页 |
| ·RT-PCR扩增产物测序 | 第60-64页 |
| ·PSTVd比对结果及测序报告 | 第60-61页 |
| ·TSWV比对结果及测序报告 | 第61页 |
| ·PVM比对结果及测序报告 | 第61-62页 |
| ·不同PVM引物RT-PCR扩增后的测序结果 | 第62-64页 |
| 3.讨论 | 第64-68页 |
| ·PVM供试材料可能为病毒新株系的猜测 | 第64页 |
| ·TSWV和PSTVd双重RT-PCR检测中的问题 | 第64-66页 |
| ·RT-PCR检测技术的应用 | 第66页 |
| ·RT-PCR检测法和ELISA检测法比较 | 第66页 |
| ·马铃薯病毒RT-PCR检测 | 第66-67页 |
| ·反转录种不同病毒下游引物量 | 第66-67页 |
| ·Mg~(2+)浓度的影响 | 第67页 |
| ·多重RT-PCR退火温度的选择 | 第67页 |
| ·RT-PCR产物的克隆和测序 | 第67-68页 |
| 第四章 创新与展望 | 第68-69页 |
| 创新 | 第68页 |
| 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第80页 |
