| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-26页 |
| ·IFN-τ在妊娠识别中的作用机理 | 第12-20页 |
| ·溶黄体机制 | 第12-13页 |
| ·IFN-τ与妊娠识别过程 | 第13-14页 |
| ·IFN-τ基因的结构 | 第14页 |
| ·IFN-τ的同源性 | 第14-15页 |
| ·IFN-τ的表达及表达调控 | 第15页 |
| ·IFN-τ的妊娠识别作用机制 | 第15-20页 |
| ·IFN-τ基因的体外重组表达研究 | 第20页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第20-24页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的构成 | 第21-23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的外源基因的整合和转化方式 | 第23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的外源基因表达方式及影响因素 | 第23-24页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的应用前景 | 第24页 |
| ·目的意义和主要研究内容 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-37页 |
| ·试验材料 | 第26-29页 |
| ·pET-28a-bIFN-τ克隆质粒 | 第26页 |
| ·载体与菌株 | 第26页 |
| ·生物信息学网络资源及应用软件 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·所用溶液及其配制 | 第27-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-37页 |
| ·bIFN-τ-His_6基因的克隆 | 第29-32页 |
| ·bIFN-τ成熟蛋白和bIFN-τ-His_6表达产物基因生物信息学分析 | 第32页 |
| ·bIFN-τ成熟蛋白及其表达产物编码蛋白生物信息学分析 | 第32页 |
| ·bIFN-τ和bIFN-τ-His_6在毕赤酵母中密码子偏爱性分析 | 第32页 |
| ·毕赤酵母表达载体pPIC9K-blFN-τ-His_6的构建 | 第32-33页 |
| ·重组表达载体质粒的转化 | 第33-35页 |
| ·毕赤酵母重组子的筛选及鉴定 | 第35页 |
| ·阳性重组子诱导表达及SDS-PSGE分析 | 第35-36页 |
| ·IMAC方法纯化重组融合蛋白 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-50页 |
| ·bIFN-τ-His_6基因的克隆 | 第37页 |
| ·bIFN-τ成熟蛋白和bIFN-τ-His_6表达产物基因生物信息学分析 | 第37-39页 |
| ·氨基酸翻译和蛋白质组分分析 | 第37-38页 |
| ·采用NCBI对ORF进行分析 | 第38-39页 |
| ·bIFN-τ成熟蛋白和及其表达产物编码蛋白的生物信息学分析 | 第39-42页 |
| ·蛋白质疏水性预测 | 第39-40页 |
| ·蛋白质磷酸化位点预测 | 第40页 |
| ·蛋白质N-糖基化位点预测 | 第40-41页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第41-42页 |
| ·蛋白质三级结构预测 | 第42页 |
| ·bIFN-τ成熟蛋白及其表达产物在毕赤酵母中密码子偏爱性分析 | 第42-46页 |
| ·bIFN-τ-His_6基因pPIC9K表达载体的构建及鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·重组酵母的筛选结果 | 第47-48页 |
| ·重组酵母菌液PCR的筛选 | 第47-48页 |
| ·重组酵母表型的筛选 | 第48页 |
| ·重组酵母高表达克隆的筛选 | 第48页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析与纯化 | 第48-50页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第48-49页 |
| ·表达产物的纯化 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-56页 |
| ·bIFN-τ基因扩增中引物的设计 | 第50-51页 |
| ·bIFN-τ-His_6真核表达蛋白的生物信息学分析 | 第51页 |
| ·酵母表达系统的选择依据 | 第51页 |
| ·影响bIFN-τ-His_6在pPIC9K/GS115表达体系中表达的因素 | 第51-54页 |
| ·外源基因拷贝数 | 第52页 |
| ·外源基因密码子偏爱性 | 第52-53页 |
| ·阳性转化子表型 | 第53页 |
| ·培养条件优化 | 第53-54页 |
| ·bIFN-τ-His_6在毕赤酵母中分泌表达的糖基化 | 第54-55页 |
| ·bIFN-τ-His_6重组蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
