| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| ·课题的提出 | 第8-9页 |
| ·microRNA的发现及命名 | 第9-10页 |
| ·microRNA的发现 | 第9页 |
| ·microRNA的命名 | 第9-10页 |
| ·microRNA的生物合成与特点 | 第10-13页 |
| ·microRNA的生物合成 | 第10-12页 |
| ·植物与动物microRNA的区别 | 第12-13页 |
| ·植物microRNA的特点 | 第13页 |
| ·有关microRNA的研究方法 | 第13-15页 |
| ·直接克隆的方法 | 第13页 |
| ·正向遗传筛选法 | 第13-14页 |
| ·生物信息学 | 第14页 |
| ·其他方法 | 第14-15页 |
| ·植物microRNA的生物学功能 | 第15-18页 |
| ·植物microRNA与生长发育的关系 | 第15-17页 |
| ·植物microRNA与逆境的关系 | 第17-18页 |
| ·本研究的内容和目的 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株、质粒及试剂 | 第20页 |
| ·菌株及质粒 | 第20页 |
| ·相关试剂 | 第20页 |
| ·引物序列及相关信息 | 第20-21页 |
| ·目的基因的扩增 | 第21-22页 |
| ·Sly-mir156a片段的获得 | 第21-22页 |
| ·Sly-mir169c片段的获得 | 第22页 |
| ·PCR产物的回收及纯化 | 第22-23页 |
| ·TA克隆 | 第23-24页 |
| ·纯化目的片段与pMD18-T载体的重组连接 | 第23页 |
| ·重组体的转化与筛选 | 第23页 |
| ·重组质粒转化鉴定与测序分析 | 第23-24页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第24-26页 |
| ·目的片段的双酶切(Sac Ⅰ和Sal Ⅰ) | 第24-25页 |
| ·pMV表达载体的双酶切(Sac Ⅰ和Xho Ⅰ) | 第25页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第25页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第25-26页 |
| ·遗传转化 | 第26-27页 |
| ·番茄转化再生植株的PCR阳性检测 | 第27页 |
| ·番茄转化再生植株的Southern杂交检测 | 第27-29页 |
| ·酶切 | 第27页 |
| ·凝胶处理 | 第27页 |
| ·印迹 | 第27-28页 |
| ·杂交 | 第28页 |
| ·洗膜及检测 | 第28-29页 |
| ·目的基因表达量的检测 | 第29页 |
| ·microRNA预测靶基因组织表达量的检测 | 第29-30页 |
| ·转基因植株功能鉴定 | 第30-31页 |
| ·转Sly-mir156a基因植株表型观察 | 第30页 |
| ·转Sly-mir169c基因植株苗期抗逆性实验 | 第30-31页 |
| ·耐旱性实验 | 第30页 |
| ·耐盐性实验 | 第30页 |
| ·气孔开度及气孔导度测定 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-48页 |
| ·Sly-mir156a及Sly-mir169c的克隆 | 第31-33页 |
| ·表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·转基因植株的获得 | 第34页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第34-35页 |
| ·转基因植株的Southern杂交检测 | 第35-37页 |
| ·目的基因表达量的检测 | 第37-38页 |
| ·microRNA靶基因组织表达量的检测 | 第38-41页 |
| ·Sly-mir156a转基因植株T_1代植株表型观察 | 第41-43页 |
| ·Sly-mir169c转基因植株抗逆性检测 | 第43-48页 |
| ·耐旱性检测 | 第43-44页 |
| ·耐盐性检测 | 第44-46页 |
| ·气孔观察 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| ·超量表达microRNA研究其功能 | 第48-49页 |
| ·miR156与番茄生长发育的关系 | 第49-50页 |
| ·miR169与番茄非生物逆境应答的关系 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
