| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1 IL-6与GM-CSF对基因疫苗的免疫增强作用研究进展 | 第13-17页 |
| ·IL-6免疫增强作用研究进展 | 第13-15页 |
| ·IL-6的产生及分子结构 | 第13-14页 |
| ·IL-6的生物学功能 | 第14页 |
| ·IL-6免疫增强作用研究进展 | 第14-15页 |
| ·GM-CSF免疫增强作用研究进展 | 第15-17页 |
| ·GM-CSF的产生及分子结构 | 第15-16页 |
| ·GM-CSF的生物学功能 | 第16页 |
| ·GM-CSF免疫增强作用研究进展 | 第16-17页 |
| ·重组细胞因子融合蛋白研究进展 | 第17页 |
| 2 生长抑素基因免疫研究进展 | 第17-23页 |
| ·生长抑素(SS)的结构及分布 | 第18页 |
| ·生长抑素(SS)作用机制及生理作用 | 第18-19页 |
| ·生长抑素(SS)作用机制 | 第18-19页 |
| ·生长抑素(SS)生理作用 | 第19页 |
| ·生长抑素的免疫调控 | 第19-20页 |
| ·生长抑素基因免疫 | 第20-23页 |
| ·生长抑素DNA疫苗的构建 | 第20-21页 |
| ·生长抑素DNA疫苗的免疫效力 | 第21-23页 |
| ·生长抑素基因免疫存在的问题 | 第23页 |
| 3 染色体-质粒平衡致死系统的研究进展 | 第23-26页 |
| ·染色体-质粒平衡致死系统的概念 | 第23页 |
| ·以asd基因为标志的平衡致死系统 | 第23-24页 |
| ·染色体-质粒平衡致死系统在基因疫苗中的的应用 | 第24-26页 |
| 第二章 实验研究 | 第26-57页 |
| 目的和意义 | 第26-27页 |
| (一) 奶牛白细胞介素6基因的克隆 | 第27-36页 |
| 1 前言 | 第27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-32页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·奶牛血样 | 第27页 |
| ·工具酶、试剂盒与常规试剂 | 第27页 |
| ·试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·外周血单核细胞(PBMC)的分离及诱导培养 | 第28页 |
| ·单核细胞总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·引物的设计与合成 | 第29页 |
| ·RT反转录及PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的回收 | 第30页 |
| ·将扩增片段克隆到pEASY-T1-simple载体中 | 第30-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-34页 |
| ·牛淋巴细胞中总RNA | 第32页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第32-33页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·IL6片段测序与分析 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| (二) 非抗性筛选生长抑素真核表达质粒PGS/2SS-IL6-ASD的构建与鉴定 | 第36-45页 |
| 1 前言 | 第36-37页 |
| 2 材料和方法 | 第37-41页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·质粒、细菌和细胞 | 第37页 |
| ·仪器设备 | 第37页 |
| ·酶和试剂 | 第37页 |
| ·试剂的配制 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-41页 |
| ·非抗性筛选生长抑素真核表达质粒构建 | 第37-40页 |
| ·质粒的表达鉴定 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-43页 |
| ·质粒pGS/2SS-IL6-asd(x6097)鉴定 | 第41-42页 |
| ·质粒pGS/2SS-IL6-asd(C500)鉴定 | 第42-43页 |
| ·pGS/2SS-IL6-asd质粒转染HeLa细胞后的转录水平 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| (三) 非抗性筛选生长抑素DNA免疫对小鼠生长的影响 | 第45-53页 |
| 1 前言 | 第45页 |
| 2 材料和方法 | 第45-48页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·质粒和菌株 | 第45页 |
| ·实验动物 | 第45页 |
| ·实验试剂及其配制 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·疫苗的制备 | 第46页 |
| ·实验动物及其免疫方法 | 第46-47页 |
| ·血浆的收集 | 第47页 |
| ·小鼠的饲养管理及称重 | 第47-48页 |
| ·生长抑素IgG抗体效价的检测 | 第48页 |
| ·数据分析 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-51页 |
| ·免疫反应 | 第48-50页 |
| ·增重效果 | 第50-51页 |
| ·各组免疫小鼠不同时期的增重比较 | 第50页 |
| ·各免疫组小鼠总增重比较 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| (四) PGS/2SS-IL6-ASD免疫小鼠的染色体整合分析 | 第53-57页 |
| 1 前言 | 第53页 |
| 2 材料与方法 | 第53-54页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·疫苗 | 第53页 |
| ·酶及试剂盒 | 第53页 |
| ·其它试剂的配制 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-54页 |
| ·组织的准备 | 第53-54页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第54页 |
| ·基因组DNA浓度测定 | 第54页 |
| ·内参基因的扩增 | 第54页 |
| ·目的基因的扩增 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-56页 |
| ·方法学鉴定 | 第54-55页 |
| ·目的基因扩增 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
