| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第1章 综述 | 第13-21页 |
| 1.1 背景概况 | 第13页 |
| 1.2 植物的初生代谢与次生代谢简况 | 第13-14页 |
| 1.3 托品烷生物碱 | 第14-17页 |
| 1.3.1 托品烷生物碱的合成途径 | 第14-16页 |
| 1.3.2 托品烷生物碱代谢工程 | 第16-17页 |
| 1.4 小G蛋白 | 第17-21页 |
| 1.4.1 小G蛋白的发现 | 第17-18页 |
| 1.4.2 小G蛋白的种类 | 第18页 |
| 1.4.3 小G蛋白的功能 | 第18-19页 |
| 1.4.4 ROPGTPase蛋白的功能 | 第19-21页 |
| 第2章 绪论 | 第21-25页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第21页 |
| 2.2 研究内容 | 第21-23页 |
| 2.3 技术路线 | 第23-25页 |
| 第3章 材料与方法 | 第25-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-28页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 3.1.2 质粒、菌株 | 第25页 |
| 3.1.3 试剂、试剂盒及酶的购买 | 第25页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第25-26页 |
| 3.1.5 常用试剂配制 | 第26-27页 |
| 3.1.6 常用培养基 | 第27-28页 |
| 3.2 常规实验方法与操作步骤 | 第28-32页 |
| 3.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备(超级感受态制备法) | 第28页 |
| 3.2.2 DNA目的条带的回收 | 第28页 |
| 3.2.3 质粒的提取 | 第28-29页 |
| 3.2.4 农杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 3.2.5 连接产物或质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第29-30页 |
| 3.2.6 表达载体冻融法转化农杆菌 | 第30页 |
| 3.2.7 TPS法提取颠茄基因组DNA(仅用于PCR检测) | 第30页 |
| 3.2.8 CTAB法提取颠茄基因组DNA | 第30-31页 |
| 3.2.9 RNA提取 | 第31页 |
| 3.2.10 RNA检测 | 第31页 |
| 3.2.11 RNA的反转录 | 第31-32页 |
| 3.2.13 半定量RT-PCR | 第32页 |
| 3.3 AbRac基因的克隆、突变与分析 | 第32-35页 |
| 3.3.1 颠茄总RNA的提取与检测 | 第32页 |
| 3.3.2 颠茄cDNA的获得 | 第32页 |
| 3.3.3 AbRac基因的克隆 | 第32-34页 |
| 3.3.4 AbRac的突变 | 第34-35页 |
| 3.4 AbRac及莨菪碱合成相关基因的表达模式分析 | 第35-36页 |
| 3.5 植物表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.6 转基因植株的获得 | 第37-38页 |
| 3.6.1 颠茄种子的萌发 | 第37页 |
| 3.6.2 颠茄植株的转化 | 第37-38页 |
| 3.6.3 转基因植株PCR检测 | 第38页 |
| 3.6.4 转基因植株中AbRac及莨菪碱合成相关基因的表达量分析 | 第38页 |
| 3.7 颠茄托品烷生物碱的提取及相关检测 | 第38-41页 |
| 3.7.1 颠茄托品烷生物碱的提取 | 第38-39页 |
| 3.7.2 颠茄托品烷生物碱的检测仪器及方法 | 第39页 |
| 3.7.3 托品烷生物碱标准曲线制作 | 第39-41页 |
| 第4章 结果与分析 | 第41-55页 |
| 4.1 AbRac基因克隆与分析 | 第41-43页 |
| 4.1.1 AbRac基因的获得 | 第41页 |
| 4.1.2 AbRac生物信息学分析 | 第41-43页 |
| 4.2 AbRac和莨菪碱合成有关基因的组织表达谱分析 | 第43-44页 |
| 4.3 AbRac基因定点突变 | 第44-45页 |
| 4.4 AbRac、AbRac~(G15V)和AbRac~(Q64L)植物表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.5 AbRac、AbRac~(G15V)和AbRac~(Q64L)转基因植株的获得 | 第46-50页 |
| 4.5.1 AbRac、AbRac~(G15V)和AbRac~(Q64L)工程菌的构建 | 第46页 |
| 4.5.2 工程菌EHA105对颠茄的遗传转化 | 第46-47页 |
| 4.5.3 转基因颠茄T0代材料的分子检测 | 第47-50页 |
| 4.6 转基因颠茄T0代材料中莨菪碱含量检测 | 第50-52页 |
| 4.6.1 东莨菪碱和莨菪碱的标准曲线制作 | 第50页 |
| 4.6.2 转基因颠茄T0代材料中莨菪碱含量检测 | 第50-52页 |
| 4.7 AbRac及其突变体T1代转基因材料培育及分子、含量检测 | 第52-55页 |
| 4.7.1 T1代转基因材料的培育和分子检测 | 第52-53页 |
| 4.7.2 T1代转基因材料中莨菪碱含量检测 | 第53-55页 |
| 第5章 结论与展望 | 第55-57页 |
| 5.1 结论 | 第55页 |
| 5.2 展望 | 第55-57页 |
| 5.2.1 过表达AbRac突变体提高莨菪碱含量的分子机制研究 | 第55页 |
| 5.2.2 过表达AbRac突变体材料的大田试验 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 缩略词表 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 硕士期间发表论文 | 第65页 |
