| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩写 | 第8-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 乳腺癌 | 第12-13页 |
| 1.1.1 概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 乳腺癌的分子表型 | 第13页 |
| 1.2 乳腺肿瘤干细胞 | 第13-16页 |
| 1.2.1 肿瘤干细胞学说 | 第13-14页 |
| 1.2.2 肿瘤干细胞来源 | 第14-15页 |
| 1.2.3 肿瘤干细胞的异质性 | 第15页 |
| 1.2.4 乳腺肿瘤干细胞对乳腺癌的影响 | 第15-16页 |
| 1.3 转录因子FOXA2 | 第16-18页 |
| 1.3.1 转录因子概述 | 第16页 |
| 1.3.2 FOX家族概述 | 第16-17页 |
| 1.3.3 FOXA2生物学结构 | 第17页 |
| 1.3.4 FOXA2生物学功能 | 第17-18页 |
| 1.4 本文的研究背景及内容 | 第18-20页 |
| 第2章 FOXA2与三阴性乳腺肿瘤具有相关性 | 第20-37页 |
| 2.1 前言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料和实验仪器 | 第20-22页 |
| 2.2.1 实验细胞 | 第20-21页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-33页 |
| 2.3.1 乳腺癌临床数据分析 | 第22页 |
| 2.3.2 细胞株复苏、培养和冻存 | 第22-24页 |
| 2.3.3 肿瘤细胞微球体培养 | 第24-26页 |
| 2.3.4 总RNA的提取和逆转录 | 第26-27页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验 | 第27-29页 |
| 2.3.6 Western blot(WB)实验 | 第29-33页 |
| 2.3.7 统计分析 | 第33页 |
| 2.4 结果 | 第33-36页 |
| 2.4.1 FOXA2与三阴性乳腺肿瘤高度相关 | 第33-35页 |
| 2.4.2 确立FOXA2与乳腺肿瘤细胞干性研究体系 | 第35-36页 |
| 2.5 小结 | 第36-37页 |
| 第3章 敲低FOXA2后,三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的干性下调 | 第37-51页 |
| 3.1 前言 | 第37-38页 |
| 3.2 实验材料和实验仪器 | 第38-40页 |
| 3.2.1 实验细胞 | 第38页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第39-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第40页 |
| 3.3.2 高活性沉默位点选取及载体构建 | 第40-43页 |
| 3.3.3 质粒大提 | 第43-45页 |
| 3.3.4 细胞转染 | 第45页 |
| 3.3.5 转染细胞的真核抗性筛选 | 第45-46页 |
| 3.3.6 总RNA提取和逆转录 | 第46页 |
| 3.3.7 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验 | 第46页 |
| 3.3.8 Western blot(WB)实验验证细胞敲低效果及多能性差异 | 第46页 |
| 3.3.9 敲低FOXA2的乳腺癌细胞与正常乳腺癌细胞微球体培养 | 第46页 |
| 3.3.10 统计分析 | 第46页 |
| 3.4 结果和讨论 | 第46-50页 |
| 3.4.1 CRISPR/Cas9成功敲低MDA-MB-231,MCF-7细胞中FOXA2 | 第46-48页 |
| 3.4.2 敲低FOXA2的MDA-MB-231和MCF-7细胞干性标志物下调 | 第48-49页 |
| 3.4.3 敲低FOXA2的MDA-MB-231细胞微球体成球能力降低 | 第49-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 第4章 高表达FOXA2后,三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的干性上调 | 第51-57页 |
| 4.1 前言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料和实验试剂 | 第51-53页 |
| 4.2.1 实验细胞 | 第51-52页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第52-53页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第53页 |
| 4.3.2 总RNA提取和逆转录 | 第53页 |
| 4.3.3 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验 | 第53页 |
| 4.3.4 Western blot(WB)实验检测细胞干性标志物 | 第53页 |
| 4.3.5 微球体培养检测高表达FOXA2的MDA-MB-231与正常MDA-MB-231细胞成球能力 | 第53-54页 |
| 4.3.6 统计分析 | 第54页 |
| 4.4 结果和讨论 | 第54-56页 |
| 4.4.1 多西环素诱导细胞株MDA-MB-231Doxy-FOXA2中FOXA2成功 | 第54页 |
| 4.4.2 诱导表达FOXA2,三阴性乳腺肿瘤细胞MDA-MB-231Doxy-FOXA2干性标志物上调 | 第54-55页 |
| 4.4.3 诱导表达FOXA2,三阴性乳腺肿瘤细胞MDA-MB-231Doxy-FOXA2微球体成球能力增强 | 第55-56页 |
| 4.5 小结 | 第56-57页 |
| 第5章 FOXA2激活肿瘤干性相关基因ALDH1A1、ALDH1A2及OCT4的启动子 | 第57-62页 |
| 5.1 前言 | 第57页 |
| 5.2 实验材料和实验试剂 | 第57-58页 |
| 5.2.1 实验细胞 | 第57-58页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第58页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第58页 |
| 5.3 实验方法 | 第58-60页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第58页 |
| 5.3.2 转录因子结合启动子位点在线数据库分析 | 第58-59页 |
| 5.3.3 双荧光素酶报告基因实验 | 第59页 |
| 5.3.4 统计分析 | 第59-60页 |
| 5.4 结果和讨论 | 第60-61页 |
| 5.4.1 FOXA2与ALDH1A1、ALDH1A2、OCT4的启动子结合位点数据库分析 | 第60页 |
| 5.4.2 FOXA2激活肿瘤干性相关基因ALDH1A1、ALDH1A2、OCT4的启动子 | 第60-61页 |
| 5.5 小结 | 第61-62页 |
| 结论和展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录A 常用缓冲液和试剂配方 | 第68-69页 |
| 附录B 攻读学位期间发表的论文 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
