| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 1 前言 | 第13-27页 |
| ·C-反应蛋白研究进展 | 第13-17页 |
| ·C-反应蛋白简介 | 第13页 |
| ·C-反应蛋白的结构和功能 | 第13-14页 |
| ·C-反应蛋白在医学上的应用 | 第14-15页 |
| ·C-反应蛋白的检测 | 第15-16页 |
| ·C-反应蛋白的检测在水产养殖方面的研究进展 | 第16-17页 |
| ·鱼类的非特异性免疫系统 | 第17-19页 |
| ·鱼类的体液免疫 | 第17页 |
| ·鱼类的溶菌酶 | 第17-18页 |
| ·鱼类的补体 | 第18页 |
| ·鱼类的其他体液免疫 | 第18-19页 |
| ·鱼类的免疫器官和组织 | 第19-20页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第20-24页 |
| ·实时荧光定量PCR 检测技术原理 | 第20-23页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术的两种定量形式 | 第23-24页 |
| ·固相亲和层析 | 第24-25页 |
| ·载体的选择 | 第24-25页 |
| ·配基的选择 | 第25页 |
| ·本研究的目的意义 | 第25-27页 |
| 2 斜带石斑鱼-反应蛋白基因的克隆表达及序列分析 | 第27-48页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·斜带石斑鱼 | 第27页 |
| ·载体与菌株 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·所用溶液配制 | 第27-31页 |
| ·实验仪器 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·斜带石斑鱼头肾组织总RNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·第一链cDNA 的合成（M-MLV Reverse Transcriptase，Takara） | 第32页 |
| ·斜带石斑鱼CRP 基因(EC-CRP)的序列分析和原核表达 | 第32页 |
| ·斜带石斑鱼CRP 基因(EC-CRP)的原核表达 | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33-34页 |
| ·回收PCR 产物目的片段 | 第34页 |
| ·构建重组质粒 | 第34-35页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第35-36页 |
| ·基因工程重组表达菌株的诱导表达 | 第36-38页 |
| ·结果 | 第38-46页 |
| ·斜带石斑鱼总RNA 的提取，cDNA 的反转录 | 第38-39页 |
| ·CRP 基因序列分析 | 第39-42页 |
| ·CRP 基因的扩增 | 第42-44页 |
| ·CRP 重组质粒的构建 | 第44页 |
| ·CRP 重组质粒的表达 | 第44-45页 |
| ·不同温度下融合蛋白表达形式（包涵体或可溶性表达）的分析 | 第45-46页 |
| ·CRP-his 融合蛋白的纯化 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 3 斜带石斑鱼CRP 基因的差异表达 | 第48-57页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·斜带石斑鱼及处理 | 第48页 |
| ·主要试剂及溶液配制 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-50页 |
| ·斜带石斑鱼各组织总RNA 的提取 | 第49页 |
| ·第一链cDNA 的合成（M-MLV Reverse Transcriptase，Takara） | 第49页 |
| ·引物的设计 | 第49-50页 |
| ·实时定量PCR（双内参法） | 第50页 |
| ·结果 | 第50-54页 |
| ·溶藻弧菌免疫斜带石斑鱼24h 后CRP 各组织表达差异 | 第50-51页 |
| ·溶藻弧菌免疫斜带石斑鱼后各组织CRP 时间表达差异 | 第51-52页 |
| ·10ppm 苯酚处理斜带石斑鱼后CRP 时间表达差异 | 第52-53页 |
| ·20ppm CdCl_2 处理斜带石斑鱼后CRP 时间表达差异 | 第53页 |
| ·2ppm CuSO_4 处理斜带石斑鱼后CRP 时间表达差异 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 4 斜带石斑鱼血清中CRP 的提取 | 第57-63页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·斜带石斑鱼 | 第57页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第57页 |
| ·实验仪器 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-59页 |
| ·配基（PC）与凝胶的偶联 | 第58页 |
| ·装柱 | 第58页 |
| ·斜带石斑鱼血清样品的制备 | 第58页 |
| ·亲和层析法提取斜带石斑鱼血清中的CRP | 第58-59页 |
| ·测定CRP 天然蛋白溶液中CRP 的含量 | 第59页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析CRP 融合蛋白与天然蛋白 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-61页 |
| ·PC-Sepharose 亲和层析柱 | 第59-60页 |
| ·Bradford 法蛋白定量标准曲线 | 第60-61页 |
| ·CRP 天然蛋白的提取 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 5 兔抗斜带石斑鱼CRP 血清的制备 | 第63-72页 |
| ·实验材料 | 第63-64页 |
| ·实验动物 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·所用试剂和溶液的配制 | 第63-64页 |
| ·实验仪器 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-66页 |
| ·抗原的准备 | 第64页 |
| ·取对照血清 | 第64-65页 |
| ·兔抗 CRP 的制备 | 第65页 |
| ·多克隆抗体的鉴定 | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-70页 |
| ·CRP 天然蛋白与兔抗CRP 天然蛋白血清琼脂双向扩散反应 | 第66-67页 |
| ·兔抗CRP 天然蛋白血清与斜带石斑鱼血清琼脂双向扩散反应 | 第67页 |
| ·CRP 表达蛋白与兔抗CRP 表达蛋白血清琼脂双向扩散反应 | 第67-68页 |
| ·CRP 表达蛋白与兔抗CRP 天然蛋白血清琼脂双向扩散反应 | 第68-69页 |
| ·三种抗原与兔抗CRP 表达蛋白血清琼脂双向扩散反应 | 第69-70页 |
| ·红笛鲷血清与兔抗CRP 天然蛋白血清琼脂双向扩散反应 | 第70页 |
| ·ELISA 法测抗体效价 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 6 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简历 | 第80-81页 |
| 导师简介 | 第81页 |
