| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 基因编辑与CRISPR-Cas9系统 | 第15-20页 |
| 1.1.1 传统基因编辑技术 | 第15-16页 |
| 1.1.2 CRISPR-Cas9系统介绍 | 第16-18页 |
| 1.1.3 CRISPR系统的应用 | 第18-20页 |
| 1.2 抗生素杀菌与细菌耐药性的产生 | 第20-25页 |
| 1.2.1 传统抗生素的分类与作用机制 | 第20-21页 |
| 1.2.2 细菌耐药性的产生 | 第21-23页 |
| 1.2.3 针对耐药菌的传统疗法和新型疗法 | 第23-25页 |
| 1.2.3.1 传统治疗方法----抗生素治疗 | 第23-24页 |
| 1.2.3.2 噬菌体及噬菌体裂解酶疗法 | 第24页 |
| 1.2.3.3 金属螯合剂 | 第24-25页 |
| 1.2.3.4 光动力疗法 | 第25页 |
| 1.3 研究依据与目的 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-37页 |
| 2.1 实验设备与主要试剂及配制 | 第27-30页 |
| 2.1.1 实验仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要试剂溶液配制 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-37页 |
| 第三章 CRISPR-Cas9系统对E.coli基因组的编辑 | 第37-44页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 利用CRISPR-Cas9进行ftnA单基因敲除 | 第37-39页 |
| 3.3 利用CRISPR-Cas9进行ftnAftnB双基因敲除 | 第39-41页 |
| 3.4 利用CRISPR-Cas9进行kdpD点突变 | 第41-44页 |
| 第四章 CRISPR-Cas9系统对细菌耐药性的逆转 | 第44-59页 |
| 4.1 前言 | 第44-45页 |
| 4.2 相关耐药质粒,菌株构建 | 第45-46页 |
| 4.2.1 KPC,NDM,OXA耐药质粒的构建 | 第45页 |
| 4.2.2 针对耐药质粒的CRISPR-Cas9相关质粒的构建 | 第45-46页 |
| 4.3 针对碳青霉烯类抗生素耐药性的逆转 | 第46-56页 |
| 4.3.1 MIC测定 | 第46-47页 |
| 4.3.2 CRISPR系统对耐药质粒传播的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.3 非诱导条件下CRISPR系统对耐药质粒的消除情况 | 第48-52页 |
| 4.3.3.1 针对耐药基因进行单位点切割 | 第48-50页 |
| 4.3.3.2 针对耐药基因进行双位点切割 | 第50-52页 |
| 4.3.4 IPTG诱导情况下CRISPR系统对耐药质粒的消除情况 | 第52-56页 |
| 4.3.4.1 IPTG诱导sgRNA表达对WT中耐药质粒消除效率的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.4.2 IPTG诱导sgRNA表达对同源修复缺陷型菌株中耐药质粒消除效率的影响 | 第53-56页 |
| 4.4 针对多粘菌素类耐药性的逆转 | 第56-59页 |
| 4.4.1 多粘菌素类耐药菌MIC的测定及针对耐药基因的CRISPR-Cas9相关质粒的构建 | 第56-57页 |
| 4.4.2 非诱导情况下CRISPR系统对耐药质粒的消除情况 | 第57-58页 |
| 4.4.3 IPTG诱导情况下CRISPR系统对耐药质粒的消除情况 | 第58-59页 |
| 第五章 Cloning-free CRISPR | 第59-61页 |
| 5.1 前言 | 第59页 |
| 5.2 Cloning-free CRISPR系统质粒构建及对耐药质粒消除 | 第59-61页 |
| 第六章 讨论与展望 | 第61-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录 | 第71-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第83页 |
| 录用证明 | 第83页 |
