缩略词对照表 | 第10-11页 |
中文摘要 | 第11-12页 |
英文摘要 | 第12-14页 |
1 前言 | 第14-22页 |
1.1 肥胖与脂肪细胞 | 第14-15页 |
1.1.1 肥胖 | 第14页 |
1.1.2 脂肪组织 | 第14-15页 |
1.2 脂肪细胞分化 | 第15-18页 |
1.2.1 脂肪细胞的体外研究模型 | 第15页 |
1.2.2 脂肪细胞分化过程 | 第15-16页 |
1.2.3 脂肪细胞分化的转录调控 | 第16-18页 |
1.3 Adp | 第18-21页 |
1.3.1 Adp 的结构 | 第18-19页 |
1.3.2 Adp 的功能 | 第19-21页 |
1.4 本课题研究的目的、内容和意义 | 第21-22页 |
2 实验材料与方法 | 第22-55页 |
2.1 实验材料 | 第22-27页 |
2.1.1 实验药品 | 第22-24页 |
2.1.2 酶 | 第24页 |
2.1.3 抗体 | 第24页 |
2.1.4 材料及仪器 | 第24-26页 |
2.1.5 质粒 | 第26页 |
2.1.6 菌株 | 第26页 |
2.1.7 细胞株 | 第26-27页 |
2.2 实验方法 | 第27-55页 |
2.2.1 分子克隆实验 | 第27-36页 |
2.2.1.1 感受态的制备 | 第27-28页 |
2.2.1.3 质粒DNA转化实验 | 第28-29页 |
2.2.1.3 质粒DNA小量抽提 | 第29-30页 |
2.2.1.4 质粒DNA中量抽提 | 第30-32页 |
2.2.1.5 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
2.2.1.6 DNA琼脂糖凝胶回收 | 第33-34页 |
2.2.1.7 质粒的构建 | 第34-36页 |
2.2.2 细胞相关实验 | 第36-41页 |
2.2.2.1 细胞系培养 | 第36-38页 |
2.2.2.2 细胞冻存 | 第38页 |
2.2.2.3 3T3-L1细胞诱导分化 | 第38-39页 |
2.2.2.4 油红染色观察3T3-L1细胞分化 | 第39-40页 |
2.2.2.5 细胞转染 | 第40页 |
2.2.2.6 慢病毒的包装与感染 | 第40-41页 |
2.2.3 RNA相关实验 | 第41-43页 |
2.2.3.1 Trizol法小量提取总RRNA | 第42页 |
2.2.3.2 逆转录为 cDNA | 第42-43页 |
2.2.3.3 实时荧光定量PCR | 第43页 |
2.2.4 蛋白质相关实验 | 第43-55页 |
2.2.4.1 细胞总蛋白的提取及样品制备 | 第44页 |
2.2.4.2 提取细胞核蛋白 | 第44-46页 |
2.2.4.3 串联亲和层析纯化蛋白 | 第46-48页 |
2.2.4.4 免疫共沉淀实验 | 第48-49页 |
2.2.4.5 蛋白质免疫印迹法 | 第49-52页 |
2.2.4.6 银染 | 第52-55页 |
3 结果与分析 | 第55-73页 |
3.1 Adp抑制脂肪细胞分化 | 第55-56页 |
3.2 Adp 通过与DDB1-CUL4 形成E3复合体发挥作用 | 第56-57页 |
3.3 检测Adp 对PPARγ等的影响 | 第57-58页 |
3.4 纯化Adp 相互作用蛋白 | 第58-73页 |
3.4.1 鉴定Adp 作用时期 | 第58-60页 |
3.4.2 初步纯化Adp 相互作用蛋白 | 第60-64页 |
3.4.3 检测标签对Adp 功能的影响 | 第64-66页 |
3.4.4 以Flag-Adp 来纯化Adp 相互作用蛋白 | 第66-68页 |
3.4.5 以NLS-Flag-Adp来纯化Adp 相互作用蛋白 | 第68-70页 |
3.4.6 Adp作用于Mybbpla | 第70-73页 |
4 讨论 | 第73-75页 |
参考文献 | 第75-81页 |
致谢 | 第81页 |