| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 英文缩略语对照表 | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 研究背景 | 第10-11页 |
| 1.2 结直肠癌的病理学特征以及分子学特征 | 第11-13页 |
| 1.3 结直肠癌的治疗 | 第13-14页 |
| 1.3.1 手术切除 | 第13-14页 |
| 1.3.2 放射疗法 | 第14页 |
| 1.3.3 化学疗法 | 第14页 |
| 1.4 5-氟尿嘧啶 | 第14-15页 |
| 1.4.1 5-氟尿嘧啶的作用机制 | 第15页 |
| 1.5 肿瘤的耐药性和转移 | 第15-16页 |
| 1.6 甲基化芯片分析技术 | 第16-17页 |
| 1.7 课题意义以及实验设计 | 第17-18页 |
| 第二章 人结肠癌HCT-8细胞5-FU耐药株的构建 | 第18-23页 |
| 2.1 前言 | 第18页 |
| 2.2 材料和设备 | 第18-20页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第18页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.2.4 主要溶液的配制 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-22页 |
| 2.3.1 细胞复苏 | 第20页 |
| 2.3.2 细胞传代 | 第20页 |
| 2.3.3 细胞冻存 | 第20-21页 |
| 2.3.4 5-FU耐药株的构建 | 第21页 |
| 2.3.5 CCK8法检测细胞耐药倍数 | 第21-22页 |
| 2.4 实验结果 | 第22-23页 |
| 2.4.1 耐药倍数确定 | 第22-23页 |
| 第三章 甲基化芯片分析以及差异基因挑选 | 第23-34页 |
| 3.1 前言 | 第23页 |
| 3.2 材料和设备 | 第23-24页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第23-24页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第24页 |
| 3.3 实验方法 | 第24-28页 |
| 3.3.1 甲基化芯片分析方法 | 第24-26页 |
| 3.3.2 总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 3.3.3 总蛋白的提取 | 第27页 |
| 3.3.4 qRT-PCR验证NME2基因mRNA表达 | 第27页 |
| 3.3.5 Western Blotting | 第27-28页 |
| 3.3.6 焦磷酸测序验证NME2基因甲基化程度 | 第28页 |
| 3.4 实验结果 | 第28-34页 |
| 3.4.1 甲基化芯片分析结果 | 第28-29页 |
| 3.4.2 差异基因的筛选 | 第29页 |
| 3.4.3 差异位点所在基因生物功能富集分析 | 第29-31页 |
| 3.4.4 目的基因的筛选及简介 | 第31页 |
| 3.4.5 qRT-PCR表达验证结果 | 第31-32页 |
| 3.4.6 Western Blotting表达验证结果 | 第32页 |
| 3.4.7 焦磷酸测序验证NME2基因甲基化程度结果 | 第32-34页 |
| 第四章 NME2基因功能验证 | 第34-52页 |
| 4.1 前言 | 第34页 |
| 4.2 材料和设备 | 第34-35页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第34-35页 |
| 4.2.2 主要仪器设备 | 第35页 |
| 4.2.3 实验材料 | 第35页 |
| 4.3 实验方法 | 第35-41页 |
| 4.3.1 Lipofectamine 2000最佳转染条件的确定 | 第35-37页 |
| 4.3.2 干扰NME2基因对于耐药性的影响(CCK8实验) | 第37-38页 |
| 4.3.3 细胞凋亡实验 | 第38页 |
| 4.3.4 Transwell小室迁移实验 | 第38-39页 |
| 4.3.5 划痕实验 | 第39页 |
| 4.3.6 慢病毒感染实验 | 第39-41页 |
| 4.4 实验结果 | 第41-52页 |
| 4.4.1 siRNA干扰实验结果 | 第41-46页 |
| 4.4.2 慢病毒过表达实验结果 | 第46-49页 |
| 4.4.3 凋亡实验结果 | 第49-52页 |
| 结论和讨论 | 第52-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 攻读硕士期间取得的科研成果 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
