| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一部分 综述 | 第14-24页 |
| 1 精原干细胞研究进展 | 第14-18页 |
| 1.1 SSCs的起源 | 第14页 |
| 1.2 SSCs的生物活性 | 第14-15页 |
| 1.3 SSCs的分子标记 | 第15页 |
| 1.4 SSCs Niche | 第15-16页 |
| 1.5 SSCs体外培养体系 | 第16页 |
| 1.6 SSCs的移植 | 第16-18页 |
| 2 支持细胞的功能研究 | 第18-24页 |
| 2.1 睾丸支持细胞的生物学特性 | 第18-19页 |
| 2.2 睾丸支持细胞的蛋白标记 | 第19页 |
| 2.3 支持细胞的分泌物质 | 第19-20页 |
| 2.4 支持细胞对精子发生的作用 | 第20-21页 |
| 2.5 支持细胞对精原干细胞增殖的作用 | 第21-22页 |
| 2.6 FGF2的作用 | 第22-24页 |
| 第二部分 实验研究 | 第24-59页 |
| 前言 | 第24-25页 |
| 1 水牛睾丸支持细胞的分离纯化 | 第25-41页 |
| 1.1 材料 | 第25-30页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第25页 |
| 1.1.2 主要实验仪器设备 | 第25-26页 |
| 1.1.3 主要实验试剂及耗材 | 第26-27页 |
| 1.1.4 主要试剂溶液配制 | 第27-30页 |
| 1.1.5 生物信息学分析用软件 | 第30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 1.2.1 水牛睾丸组织固定及石蜡包埋 | 第30页 |
| 1.2.2 水牛睾丸免疫组织化学分析 | 第30-31页 |
| 1.2.3 两步酶法消化水牛睾丸 | 第31页 |
| 1.2.4 幼牛支持细胞的纯化 | 第31页 |
| 1.2.5 鉴定 | 第31-35页 |
| 1.3 实验结果 | 第35-39页 |
| 1.3.1 水牛睾丸组织中细胞定位 | 第35-36页 |
| 1.3.2 支持细胞贴壁性质分析 | 第36-37页 |
| 1.3.3 支持细胞的纯化 | 第37-38页 |
| 1.3.4 支持细胞的鉴定 | 第38-39页 |
| 1.4 讨论 | 第39-40页 |
| 1.5 小结 | 第40-41页 |
| 2 不同发育阶段水牛支持细胞培养精原干细胞 | 第41-50页 |
| 2.1 材料 | 第41-42页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第41页 |
| 2.1.2 主要实验设备仪器 | 第41页 |
| 2.1.3 主要实验试剂及耗材 | 第41页 |
| 2.1.4 主要实验溶液配制 | 第41-42页 |
| 2.1.5 生物统计用软件 | 第42页 |
| 2.2 实验方法 | 第42-46页 |
| 2.2.1 水牛精原干细胞的富集 | 第42-43页 |
| 2.2.2 分离纯化成年水牛支持细胞 | 第43页 |
| 2.2.3 成年水牛和幼牛水牛支持细胞的培养 | 第43页 |
| 2.2.4 支持细胞的冷冻、复苏、传代培养 | 第43-45页 |
| 2.2.4.1 细胞的换液与传代培养 | 第43-44页 |
| 2.2.4.2 细胞的冻存 | 第44页 |
| 2.2.4.3 细胞的复苏 | 第44-45页 |
| 2.2.5 精原干细胞与支持细胞共培养 | 第45页 |
| 2.2.6 qRT-PCR | 第45-46页 |
| 2.3 实验结果 | 第46-48页 |
| 2.3.1 成年水牛和幼年水牛支持细胞的培养以及其细胞内生长因子的基因表达量 | 第46-47页 |
| 2.3.2 共培养精原干细胞与支持细胞 | 第47-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-49页 |
| 2.5 小结 | 第49-50页 |
| 3 构建水牛支持细胞FGF2基因过表达系 | 第50-59页 |
| 3.1 材料 | 第50-51页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第50页 |
| 3.1.2 主要实验设备仪器 | 第50页 |
| 3.1.3 主要实验试剂与耗材 | 第50页 |
| 3.1.4 主要实验溶液配制 | 第50-51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 3.2.1 引物设计与合成 | 第51-52页 |
| 3.2.2 FGF2基因的RT-PCR | 第52页 |
| 3.2.3 胶回收以及DNA的纯化 | 第52页 |
| 3.2.4 18-T载体的连接 | 第52页 |
| 3.2.5 PEGFP-N1重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| 3.2.6 PEGFP-N1-FGF2质粒的稳定转染 | 第53-54页 |
| 3.2.7 FGF2基因在支持细胞中的表达 | 第54页 |
| 3.3 实验结果 | 第54-57页 |
| 3.3.1 水牛FGF2基因的克隆 | 第54-55页 |
| 3.3.2 水牛FGF2基因PEGFP-N1载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.3.3 水牛FGF2基因在支持细胞中的表达 | 第56-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-58页 |
| 3.5 小结 | 第58-59页 |
| 总结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-72页 |
| 附表 词汇缩写及中英文对照 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 硕士期间科研成果 | 第75页 |
