| 第一部分：特异性逆转录 miR-505 的高效茎环引物的设计 | 第7-35页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 miRNA 的简介 | 第11-17页 |
| 1.1.1 miRNA 的研究历史 | 第11-12页 |
| 1.1.2 miRNA 的形成 | 第12-13页 |
| 1.1.3 miRNA 的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.1.4 检测 miRNA 的技术 | 第14-17页 |
| 1.2 miR505 的简介 | 第17页 |
| 1.3 研究内容 | 第17-18页 |
| 1.4 研究意义 | 第18-19页 |
| 第二章 材料和方法 | 第19-25页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 试验仪器 | 第19页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 miR-505 成熟序列的获得 | 第20页 |
| 2.2.2 miR-505-3P 引物序列的设计 | 第20-21页 |
| 2.2.3 检测样本的获取 | 第21-22页 |
| 2.2.4 RNA 的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.5 RNA 定量和质检 | 第23页 |
| 2.2.6 miR505-3P 的逆转录 | 第23-24页 |
| 2.2.7 实时荧光定量 PCR 反应 | 第24页 |
| 2.2.8 转染 miR505-3P 及 Q-PCR 检测 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与分析 | 第25-29页 |
| 3.1 RNA 质量的检测 | 第25页 |
| 3.2 定量 PCR 的结果 | 第25-27页 |
| 3.3 RT-PCR 检测 miRNA-505-3P 的表达量 | 第27-29页 |
| 第四章 讨论 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-35页 |
| 第二部分：miR-505 转基因小鼠的构建与表型的检测 | 第35-74页 |
| 摘要 | 第35-37页 |
| ABSTRACT | 第37-39页 |
| 第一章 前言 | 第39-46页 |
| 1.1 转基因动物的构建 | 第39-42页 |
| 1.1.1 原核注射法转基因动物的构建 | 第39-40页 |
| 1.1.2 慢病毒介导法转基因动物的构建 | 第40-41页 |
| 1.1.3 PB 转座子介导法转基因动物的构建 | 第41-42页 |
| 1.2 研究背景 | 第42-45页 |
| 1.2.1 性发育的启动调控 | 第42-43页 |
| 1.2.2 miRNA-505 简介 | 第43-44页 |
| 1.2.3 实验室进展 | 第44-45页 |
| 1.3 技术路线 | 第45页 |
| 1.4 研究意义 | 第45-46页 |
| 第二章 材料和方法 | 第46-61页 |
| 2.1 材料 | 第46-49页 |
| 2.1.1 实验鼠的获得 | 第46页 |
| 2.1.2 小鼠的饲养 | 第46页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第46-47页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第47-48页 |
| 2.1.5 软件与网络资源 | 第48-49页 |
| 2.2 方法 | 第49-61页 |
| 2.2.1 过表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 2.2.2 原核注射 miR-505 转基因小鼠的构建 | 第50-51页 |
| 2.2.3 小鼠全基因组 DNA 抽提 | 第51页 |
| 2.2.4 转基因小鼠目的基因的 DNA 分型 | 第51-53页 |
| 2.2.5 转基因小鼠目的基因 DNA 拷贝数检测 | 第53-56页 |
| 2.2.6 小鼠组织总RNA的抽提 | 第56页 |
| 2.2.7 RNA 定量和质检 | 第56-57页 |
| 2.2.8 小鼠RNA的逆转录 | 第57-59页 |
| 2.2.9 F1 代小鼠表型的检测 | 第59-61页 |
| 第三章 结果与分析 | 第61-69页 |
| 3.1 构建的 FUGW-miR-505-3p 载体电泳结果 | 第61页 |
| 3.2 成功分型转基因阳性小鼠的结果 | 第61-62页 |
| 3.3 DNA 拷贝数检测结果 | 第62-63页 |
| 3.4 下丘脑 miR505-3P 表达量的检测以及和小鼠 VO 的关系 | 第63-64页 |
| 3.5 F1 代阴门开启结果 | 第64-65页 |
| 3.6 小鼠阴道脱落细胞的角质化情况 | 第65-66页 |
| 3.7 从 21 天分笼到 VO 的体重变化 | 第66页 |
| 3.8 F1 代 T/W 生育情况对比 | 第66-67页 |
| 3.9 生长曲线对比结果 | 第67-69页 |
| 第四章 研究结论和展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 课题来源 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间学术论文目录 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
