| 英文缩略词表 | 第9-13页 |
| 摘要 | 第13-22页 |
| 第一部分 研究在肝细胞癌家族史患者与健康无肝细胞癌家族史志愿者血浆间microRNA表达谱的不同 | 第13-14页 |
| 第二部分 在两组间血浆中表达差异明显的microRNA在其他肝癌患者血浆中的验证 | 第14-15页 |
| 第三部分 miR-216b在原发性肝细胞癌患者的癌组织中的表达量与癌旁肝组织中的表达量的变化及其与患者临床病理参数和预后的相关性 | 第15-17页 |
| 第四部分 miR-216b对于肝癌细胞系HepG2细胞和SMMC7721细胞增殖和侵袭能力的影响 | 第17-19页 |
| 第五部分 miR-216b对于肝癌细胞系HepG2细胞和SMMC7721细胞增殖和侵袭能力的影响的机制研究 | 第19-22页 |
| ABSTRACT | 第22-32页 |
| Part Ⅰ research in microRNA expression profiles in HCC plasma between HCCpatients with family history and healthy volunteers without a family history | 第22-23页 |
| Part Ⅱ Apparent differences in microRNA expression between the two groups in moreHCC patients' plasma samples verify the microarray result | 第23-25页 |
| Part Ⅲ The expression level of miR-216b in tumor tissues and adjacent liver tissue ofHCC patients and the correlation between miR-216b expression and clinicopathologicalparameters and prognosis | 第25-27页 |
| Part Ⅳ The impact of miR-216b on cell proliferation and invasion in hepatoma cellline HepG2 and SMMC7721 | 第27-30页 |
| Part Ⅴ Mechanism of the impact of miR-216b on cell proliferation and invasion inHCC cell line HepG2 cells and SMMC7721 cells | 第30-33页 |
| 研究背景 | 第33-40页 |
| 一、什么是miRNAs以及miRNAs在癌症中主要的作用机制 | 第33-34页 |
| 二、在肝癌中目前miRNAs主要的研究进展 | 第34-37页 |
| 参考文献 | 第37-40页 |
| 第一部分研究在肝细胞癌家族史患者与健康无肝细胞癌家族史志愿者血浆间microRNA表达谱的不同 | 第40-47页 |
| 实验材料 | 第40-41页 |
| 一、主要仪器 | 第40-41页 |
| 二、主要试剂 | 第41页 |
| 实验方法 | 第41-43页 |
| 一、原发性肝细胞癌家族史患者血浆制品的采集和获得 | 第41页 |
| 二、血浆中miRNA的提取和芯片实验 | 第41-43页 |
| 三、芯片所获得的结果的分析 | 第43页 |
| 实验结果 | 第43-47页 |
| 一、血浆的样品的采集 | 第43页 |
| 二、RNA的纯化质检及芯片结果 | 第43-45页 |
| 三、芯片结果的进一步分析 | 第45-47页 |
| 第二部分 在两组间血浆中表达差异明显的microRNA在其他肝癌患者血浆中的验证 | 第47-55页 |
| 实验材料 | 第47-48页 |
| 一、主要实验仪器 | 第47页 |
| 二、主要试剂 | 第47-48页 |
| 实验方法 | 第48-53页 |
| 一、更大样本血浆样品的提取 | 第48页 |
| 二、RNA及cDNA样品的制备 | 第48-51页 |
| 三、RT-PCR法验证芯片的结果 | 第51-52页 |
| 四、数据的统计和分析 | 第52-53页 |
| 实验结果 | 第53-55页 |
| 一、血浆的样品的采集 | 第53页 |
| 二、RNA的提取和cDNA的合成 | 第53页 |
| 三、RT-PCR法检测血浆中的miR-216b的表达 | 第53-54页 |
| 四、2~(-△△ct)法对于miR-216b表达的标准化 | 第54-55页 |
| 第三部分 miR-216b在肝细胞癌患者的癌组织中的表达量与癌旁肝组织中的表达量的变化及其与患者临床病理参数和预后的相关性 | 第55-67页 |
| 实验材料 | 第55-56页 |
| 一、主要实验仪器 | 第55页 |
| 二、主要试剂 | 第55-56页 |
| 实验方法 | 第56-61页 |
| 一、样本RNA的提取 | 第56-57页 |
| 二、RT-PCR法检测癌与癌旁组织miR-216b的表达量 | 第57-60页 |
| 三、miR-216b的表达与临床病理参数的相关性 | 第60-61页 |
| 四、miR-216b与患者预后的相关性研究 | 第61页 |
| 实验结果 | 第61-67页 |
| 一、目的miRNA的挑选 | 第61-62页 |
| 二、RT-PCR法检测癌与癌旁组织miR-216b的表达量 | 第62-63页 |
| 三、miR-216b的表达与临床病理参数的相关性 | 第63-64页 |
| 四、miR-216b与患者预后的相关性 | 第64-67页 |
| 第四部分 miR-216b对于肝癌细胞系HepG2细胞和SMMC7721细胞增殖和侵袭能力的影响 | 第67-90页 |
| 实验材料 | 第67-68页 |
| 一、主要实验仪器 | 第67页 |
| 二、主要试剂 | 第67-68页 |
| 三、部分试剂的配制 | 第68页 |
| 实验方法 | 第68-79页 |
| 一、用RT-PCR法检测肝细胞癌各细胞系中miR-216b的表达量 | 第68-73页 |
| 二、HepG2细胞系和SMMC-7721细胞系的转染 | 第73-74页 |
| 三、进行CCK-8实验 | 第74-75页 |
| 四、进行软琼脂克隆形成实验 | 第75-76页 |
| 五、进行划痕实验 | 第76页 |
| 六、进行Transwell实验 | 第76-78页 |
| 七、裸鼠皮下成瘤实验 | 第78-79页 |
| 实验结果 | 第79-90页 |
| 一、miR-216b在肝癌细胞系中表达以HepG2细胞为最低,以SMCC-7721细胞表达量为最高 | 第79-80页 |
| 二、转染mimics和inhibitor后,与对照组相比较,miR-216b在细胞系中的表达明显改变 | 第80页 |
| 三、miR-216b可以抑制肝癌细胞系的增殖 | 第80-82页 |
| 四、miR-216b可以抑制肝癌细胞系的克隆形成 | 第82-83页 |
| 五、miR-216b可以抑制肝癌细胞系的迁移 | 第83-85页 |
| 六、miR-216b可以抑制肝癌细胞系的侵袭 | 第85-87页 |
| 七、miR-216b可以抑制裸鼠皮下瘤的形成 | 第87-90页 |
| 第五部分 miR-216b对于肝癌细胞系HepG2细胞和SMMC7721细胞增殖和侵袭能力的影响的机制研究 | 第90-102页 |
| 实验材料 | 第90-93页 |
| 一、主要实验仪器 | 第90页 |
| 二、主要试剂 | 第90-91页 |
| 三、主要试剂的配制 | 第91-93页 |
| 实验方法 | 第93-97页 |
| 一、预测miR-216b的作用靶基因 | 第93页 |
| 二、luciferase实验 | 第93-95页 |
| 三、使用RT-PCR法和western blotting法检测KRAS在转染mimics或inhibitor后的mRNA表达水平和蛋白表达水平 | 第95-97页 |
| 四、RNA干扰KRAS的表达 | 第97页 |
| 五、KRAS的下游基因的研究 | 第97页 |
| 实验结果 | 第97-102页 |
| 一、miR-216b可以作用在KRAS基因的3’UTR区 | 第97-98页 |
| 二、经过luciferase实验,发现miR-216b的mimics和inhibitor可以作用在KRAS基因的3’UTR区的特异位点,而该位点突变后,mimics和inhibitor对于3’UTR区的结合被抑制 | 第98-99页 |
| 三、miR-216b是作用于KRAS的转录后过程 | 第99-100页 |
| 四、敲除KRAS基因后,miR-216b inhibitor对于SMCC-7721细胞的增殖的促进作用消失 | 第100-101页 |
| 五、miR-216b可以影响KRAS下游p-AKT和p-ERK的表达 | 第101-102页 |
| 全文讨论 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-107页 |
| 文献综述 | 第107-122页 |
| 参考文献 | 第115-122页 |
| 附录1 攻读博士学位期间发表的主要论文 | 第122-123页 |
| 附录2 博士生期间参与的课题研究情况 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
